[发明专利]从鸡血中提取抑菌肽的方法

说明书

本发明公开了从鸡血中提取抑菌肽的方法，其具体步骤为：向新鲜鸡血中加入六偏磷酸钠水溶液，搅拌均匀，离心后弃沉淀，调节上清液的pH值，即得抗凝鸡血；利用抗凝鸡血粉配制发酵培养基，接种黑曲霉发酵，离心上清液即为发酵液；将发酵液超滤获得抗菌肽粗提液；将抗菌肽粗提液进行凝胶层析，上样后用双蒸水洗脱，收集抗菌活性较高的组分，冷冻干燥即得鸡血抗菌肽。有益效果为：本发明提取方法简单可行，提取效率、得率和纯度高，制得的抗菌肽活性高、可快速杀灭细菌、有广谱的抗菌特性的鸡血抗菌肽的提取方法。

技术领域

本发明涉及生物提取技术领域，特别涉及从鸡血中提取抑菌肽的方法。

背景技术

自从抗生素被发现后，由于它具有良好的抑菌效果被广泛地应用于医疗、传统兽药和饲料添加剂中，但是也由于抗生素的过度使用，致病菌的耐药性和药物残留等问题越来越严重，逐渐引起了人们的重视，寻找抗生素的有效替代品，解决耐药性及药物残留问题，迫在眉睫。而抗菌肽（Antimicrobial peptides，AMPs）是一种原核生物及真核生物均能产生的、分布广泛且种类繁多的、具有广谱抗菌活性的多肽类物质，它对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、真菌、原生动物、癌细胞、病毒等均有明显的抑制作用，被视为具有极大应用前景的抗生素替代品，成为了国内外的研究热点。抗菌肽最早是瑞典科学家Boman等在一种名叫惜古比天蚕（Hyalophora cecropia）的昆虫体内诱导并分离纯化得到的，并将其命名为天蚕素（Cecropins）。到目前为止，人们纷纷从各种原核及真核生物当中鉴定出并分离得到1700多种抗菌肽类物质。

抗菌肽的种类繁多，分布也十分广泛，随着对抗菌肽的研究深入，抗菌肽的类别也越来越清晰。目前，抗菌肽一般根据以下几个方面进行分类：根据抗菌肽的合成途径将抗菌肽分为非核糖体合成抗菌肽（non-ribosomally synthesized peptides）和核糖体合成抗菌肽（ribosomally synthesized peptides）两类。根据抗菌肽的结构分为：（1）含α-螺旋的线性抗菌肽；（2）富含某些氨基酸残基的抗菌肽；（3）含1个二硫键的抗菌肽；（4）具有β-折叠结构的抗菌肽；（5）由已知多肽衍生的具有抗菌活性的肽[31]。根据抗菌肽的来源分为：（1）细菌抗菌肽，如多粘菌素、杆菌肽等；（2）昆虫抗菌肽，如天蚕素、昆虫防御素等；（3）植物源抗菌肽，如植物防御素、凤仙花素等；（4）蛙类动物抗菌肽，如蛙皮肽；（5）水生动物抗菌肽，包括鱼类、贝类、甲壳动物类抗菌肽，种类繁多复杂；（6）哺乳动物抗菌肽，主要有防御素（Defensins）、富组蛋白（Histatins）和Cathelicidins三种。目前在鸡血中提取、纯化抗菌肽并研究其抗菌活性的研究却很少。因为鸡血中起到主要作用的免疫细胞的白细胞，而其中中性粒细胞约占鸡血中白细胞总量的70%，所以从鸡血液中提取、纯化抗菌肽是可行的。

现有技术如授权公告号为CN 104164467 B的中国发明专利，公开了一种从鸡血中提取抗菌肽的方法，该方法包括如下步骤：(1)取鸡血，进行血细胞破碎后加入木瓜蛋白酶进行酶解；(2)向酶解液中加入乙酸浸提，离心取上清，调节pH至6.0±0.5，获得鸡血抗菌肽粗提物。实验证明，利用该方法从鸡血中提取的抗菌肽对大肠杆菌、嗜水气单胞菌、绿脓杆菌等常见的致病菌有明显的抑制作用。该方法为生产抗菌肽提供了一个新的途径和方法，具有操作方便快捷、设备简单、分离提取率高、成本低的优点，可应用于大规模地从新鲜鸡血中分离纯化抗菌肽的生产。但是该鸡血抑菌剂酶解前未经抗凝处理，酶解效率低。

发明内容

本发明的目的在于提供一种投入低、操作简单、蛋白质降解效果好、抗菌肽得率和纯度高，制得的抗菌肽活性高、可快速杀灭细菌、有广谱的抗菌特性的从鸡血中提取抑菌肽的方法。

本发明针对上述技术中提到的问题，采取的技术方案为：