[发明专利]蛋白质功能化磁珠亲和探针及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种蛋白质功能化磁珠亲和探针，其特征在于，该亲和探针包括表面修饰有过渡金属离子的磁性微米粒子和负载在所述磁性微米粒子表面的N末端修饰有组氨酸标签的DNA损伤应答蛋白；

相对于0.1mL磁性微米粒子，所述DNA损伤应答蛋白的负载量为0.05-4mg。

2.根据权利要求1所述的亲和探针，其特征在于，相对于0.1mL磁性微米粒子，所述DNA损伤应答蛋白的负载量为0.1-1mg。

3.根据权利要求1所述的亲和探针，其特征在于，相对于1mL磁性微米粒子，所述磁性微米粒子的表面修饰过渡金属离子的量为20-120μmol。

4.根据权利要求1-3中任意一项所述的亲和探针，其特征在于，所述磁性微米粒子选自以超顺磁性Fe₃O₄@SiO₂为内核的核壳结构复合粒子。

5.根据权利要求4所述的亲和探针，其特征在于，所述过渡金属离子为Ni²⁺。

6.根据权利要求1-3中任意一项所述的亲和探针，其特征在于，所述磁性微米粒子的粒径为5-300μm。

7.根据权利要求1-3中任意一项所述的亲和探针，其特征在于，所述DNA损伤应答蛋白为DNA损伤的亲和结合蛋白，且N末端修饰有2-10个组氨酸。

8.根据权利要求7所述的亲和探针，其特征在于，所述DNA损伤应答蛋白为HMGB1 A-box蛋白和/或PC4蛋白，且N末端修饰有6个组氨酸。

9.根据权利要求8所述的亲和探针，其特征在于，所述HMGB1 A-box蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO∶1所示。

10.根据权利要求8或9所述的亲和探针，其特征在于，所述HMGB1A-box蛋白的应答损伤DNA功能区域氨基酸序列如SEQ ID NO∶2所示。

11.根据权利要求8或9所述的亲和探针，其特征在于，所述HMGB1A-box蛋白的表达载体为pET-28a(+)。

12.根据权利要求8所述的亲和探针，其特征在于，所述PC4蛋白氨基酸序列中或/和第86位为精氨酸或/和第96位为甲硫氨酸或/和第104位为丝氨酸。

13.根据权利要求1-3中任意一项所述的亲和探针，其特征在于，所述DNA损伤为药物致DNA损伤。

14.根据权利要求13所述的亲和探针，其特征在于，所述药物为金属抗肿瘤药物。

15.根据权利要求14所述的亲和探针，其特征在于，所述金属抗肿瘤药物为铂类抗肿瘤药物，通式为[Pt(Ⅱ)A2X2]；其中，A2为2个单齿氨配体或1个双齿氨配体；X2为2个单齿阴离子配体或一个双齿阴离子配体。

16.根据权利要求15所述的亲和探针，其特征在于，所述单齿氨配体为NH₃，所述双齿氨配体为NH₂C₂H₄NH₂；所述单齿阴离子配体为Cl。

17.一种根据权利要求1-16中任意一项所述的蛋白质功能化磁珠亲和探针的制备方法，其特征在于，所述方法包括：先将表面修饰有过渡金属离子的磁性微米粒子在缓冲液中孵育、分离，然后在接触体系中，将N末端修饰有组氨酸标签的DNA损伤应答蛋白与表面修饰有过渡金属离子的磁性微米粒子接触，然后将生成的DNA损伤应答蛋白-磁性微米粒子复合物进行清洗。