[发明专利]用于cfDNA建库的接头、引物组、试剂盒和建库方法

权利要求书

1.一种cfDNA建库的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将cfDNA进行末端修复，并在cfDNA的3’端添加A碱基；

(2)将经过步骤(1)处理后得到的cfDNA末端连接上含有随机标签序列的接头，得到连接产物，并对连接产物进行磁珠纯化；

所述接头为双链接头，包括顶部接头和底部接头，所述顶部接头的序列为：5’-ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCTNNNNNNNNNNNNGCCGCCGCCGCCG*T-3’，其为SEQ ID NO:1所示；所述底部接头的序列为：5’-P-CGGCGGCGGCGGC-3’，其为SEQ ID NO:2所示；其中顶部接头中12个碱基“NNNNNNNNNNNN”为标签序列；

(3)利用通用前引物和特异后引物对上述连接产物进行第一轮扩增，并对第一轮扩增产物进行磁珠纯化；

(4)利用引物P7和P5对磁珠纯化后的第一轮扩增产物进行建库扩增，并对建库扩增产物进行磁珠纯化，得到高通量测序文库。

2.根据权利要求1所述的cfDNA建库的方法，其特征在于，在步骤(3)中，所述通用前引物的序列为：5’-ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT-3’，其为SEQ ID NO:3所示；所述特异后引物的序列为：5’-CAGACGTGTGCTCTTCCGATCTxxxxxxxxxxxxxxxxx-3’，其为SEQ ID NO:4所示。

3.根据权利要求1所述的cfDNA建库的方法，其特征在于，在步骤(4)中，P5引物的序列：5’-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATC*T-3’，其为SEQ IDNO:5所示；P7引物的序列：5’-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGATGTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCT-3’，其为SEQ ID NO:6所示。