[发明专利]利用小泛素相关修饰物SUMO体外表达绵羊β-防御素的方法在审
| 申请号： | 201810365031.5 | 申请日： | 2018-04-23 |
| 公开（公告）号： | CN108531493A | 公开（公告）日： | 2018-09-14 |
| 发明（设计）人： | 曹贵方;王鑫;智达夫;李喜和;刘默凝;李秀男;魏薇;田志鹏;龙鑫;王大清;张福全 | 申请（专利权）人： | 内蒙古农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/62 | 分类号： | C12N15/62;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 天津市杰盈专利代理有限公司 12207 | 代理人： | 赵敬 |
| 地址： | 010018 内蒙古自*** | 国省代码： | 内蒙古;15 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 防御素 绵羊 大肠杆菌 体外表达 修饰物 泛素 抑菌 金黄色葡萄球菌 表达产物 超声破碎 理论基础 亲和层析 细胞表达 抑菌作用 重组载体 重组质粒 构建 酶切 脱盐 抗生素 浓缩 转入 基因 融合 成功 | ||
1.一种利用小泛素相关修饰物SUMO体外表达绵羊β-防御素的方法，其特征在于：它包括以下步骤：
1）、以RT-PCR的方法获得克隆了SUMO-sbd-1的成熟肽全基因序列；
2）、克隆入原核表达载体pet-22b中，构建表达载体pet-22b- SUMO-sbd-1；
3）、转化DH5α感受态细胞，提出SUMO-sbd-1蛋白；
4）、转化到BL21(DE3)感受态细胞构建表达菌株；
5）、诱导表达、超声破碎、蛋白纯化、浓缩、抑菌实验，得到绵羊β-防御素sbd-1目的蛋白。
2.根据权利要求1所述利用小泛素相关修饰物SUMO体外表达绵羊β-防御素的方法，其特征在于：所述SUMO-sbd-1成熟肽基因，其核苷酸序列为SEQ ID NO.10所示的氨基酸序列。
3.根据权利要求1所述利用小泛素相关修饰物SUMO体外表达绵羊β-防御素的方法，其特征在于：编码绵羊β-防御素sbd-1的基因。
4.根据权利要求1或3所述利用小泛素相关修饰物SUMO体外表达绵羊β-防御素的方法，其特征在于：含有绵羊β-防御素sbd-1基因的重组质粒。
5.根据权利要求4所述利用小泛素相关修饰物SUMO体外表达绵羊β-防御素的方法，其特征在于：含有绵羊β-防御素sbd-1基因的重组质粒，其为pet-22b-SUMO-sbd-1。
6.根据权利要求5所述利用小泛素相关修饰物SUMO体外表达绵羊β-防御素的方法，其特征在于：含有绵羊β-防御素sbd-1基因的重组质粒转化的宿主细胞。
7.根据权利要求6所述利用小泛素相关修饰物SUMO体外表达绵羊β-防御素的方法，其特征在于：含有绵羊β-防御素sbd-1基因的重组载体转化的宿主细胞为大肠杆菌DH5α。
8.根据权利要求6所述利用小泛素相关修饰物SUMO体外表达绵羊β-防御素的方法，其特征在于：含有绵羊β-防御素sbd-1基因的重组载体转化的宿主细胞为大肠杆菌BL21(DE3)。
9.一种利用权利要求1所述利用小泛素相关修饰物SUMO体外表达绵羊β-防御素的方法获得的绵羊β-防御素sbd-1在抗生素中的应用。
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