[发明专利]利用HTRF高通量筛选LAG3/MHCII抑制剂的方法在审
| 申请号： | 201810365258.X | 申请日： | 2018-04-19 |
| 公开（公告）号： | CN108519486A | 公开（公告）日： | 2018-09-11 |
| 发明（设计）人： | 王维娜 | 申请（专利权）人： | 浠思（上海）生物技术有限公司 |
| 主分类号： | G01N33/68 | 分类号： | G01N33/68 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 201210 上海市浦*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 高通量筛选 抑制剂 蛋白 筛选 生物制药行业 酶标仪读数 抑制剂筛选 标签抗体 人力物力 室温孵育 原始数据 微孔板 细胞株 构建 偶联 标签 检测 配置 应用 进程 | ||
1.一种利用HTRF高通量筛选LAG3/MHCII抑制剂的方法，其特征在于包括如下步骤：
步骤一，配置已构建好的带有不同标签的LAG3及MHCII蛋白，待筛选样品；
步骤二，在微孔板中依次加入待筛选样品LAG3蛋白和MHCII蛋白，上述两种对应的抗标签抗体，分别偶联Donor和Acceptor；
步骤三，室温孵育，用酶标仪读数检测读数，665nm/620nm的比值为原始数据；
其中上述偶联Donor和Acceptor的两种标签抗体分别检测相互作用的蛋白LAG3和MHCII，从而形成四个物质聚合的复合物，拉近Donor和Acceptor的距离，能量能够从Donor上转移到Acceptor上，使Acceptor产生荧光；若样品能抑制二者结合，则随着抑制剂浓度的增加，665nm/620nm的比值降低。待稳定后测定荧光值的变化便可量化抑制剂的效价IC50；检测的为HTRF两个荧光665nm和620nm，即时间分辨荧光，当665nm/620nm的比值越低，抑制剂的效应越高。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：可用于筛选的抑制剂包括小分子化合物和各种来源的抗体。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：上述LAG3和MHCII为重组蛋白，带有不同标签，其中MHCII为复杂的蛋白复合体，极难构建有结合活性的蛋白。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于：上述微孔板包括96孔板，384孔板和1536孔板。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于：该筛选方法的反应体系为20ul，最少可至8ul。
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