[发明专利]一种抗菌肽CC313js、制备方法及应用

说明书

本发明属于基因工程抗菌肽技术领域，具体涉及一种抗菌肽CC313js，所述抗菌肽CC313js的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述抗菌肽CC313js的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。该抗菌肽CC313js对多种细菌具有抑菌活性、其热稳定性好且分离纯化简单、易操作，适于大规模工业化生产，其在抗菌药物、食品抗菌剂、饲料添加剂等领域具有良好的应用前景。另外，本发明还提供了一种抗菌肽CC313js的制备方法。

技术领域

本发明属于基因工程抗菌肽技术领域，具体涉及一种抗菌肽CC313js、制备方法及应用。

背景技术

抗菌肽具有分子质量小、水溶性好、耐热性强、无免疫原性、抗菌谱广、无耐药性和作用机制独特等特点，因此被认为是能够成为替代抗生素的首选药物。但由于从天然资源中提取抗菌肽成本高、得率低、工序繁琐，化学合成则价格相当昂贵，难以应用生产，因此，利用基因工程技术生产抗菌肽具有重要意义。

天蚕素抗菌肽(cecropins)是目前研究最清楚、效果最好的天然抗菌肽；我们在前期研究工作中利用家蝇抗菌肽Cec Md与中国林蛙抗菌肽Chensirin作为母体肽所合成的杂合肽CC31具有较好的抑菌活性，但仍存在溶血活性，表达量低，不适合大规模发酵生产。

发明内容

本发明提供的一种抗菌肽CC313js、制备方法及应用，该抗菌肽CC313js溶血性低、抗菌活性高，该制备方法表达量高、分离纯化步骤简单，适用于大规模的工业化生产。

本发明提供了一种抗菌肽CC313js，用于编码所述抗菌肽CC313js的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述抗菌肽CC313js的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

本发明还提供了一种抗菌肽CC313js的制备方法，包括以下步骤：

步骤1，合成核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的目的基因；

步骤2，以限制性内切酶XbaⅠ和EcoRⅠ双酶切步骤1的目的基因，并回收目的基因片段；以限制性内切酶XbaⅠ和EcoRⅠ双酶切载体pGAPZαA，并回收载体片段；将所述目的基因和所述载体片段连接，得到含有重组载体pGAPZαA/CC313js的连接液；

步骤3，将步骤2的连接液转化至大肠杆菌感受态细胞DH5α中，并提取重组载体pGAPZαA/CC313js，得到重组载体pGAPZαA/CC313js；

步骤4，将重组载体pGAPZαA/CC313js转化到宿主细胞中，得到表达工程菌；

步骤5，培养步骤4的表达工程菌，进行抗菌肽CC313js的表达，并提取纯化，得到抗菌肽CC313js。

优选的，上述抗菌肽CC313js的制备方法中，步骤4的宿主细胞为毕赤酵母SMD1168。

本发明还提供了一种抗菌肽CC313js在制备用于治疗革兰氏阴性菌疾病药物或者用于治疗革兰氏阳性菌疾病药物中的应用。

本发明还提供了一种抗菌肽CC313js，在制备动物饲料添加剂中的应用。

本发明提供的一种抗菌肽CC313js，并应用基因工程技术在毕赤酵母中高效表达了该抗菌肽CC313js，经验证，利用该抗菌肽CC313js制备的抗菌肽Cec Md溶血性低、对多种细菌具有抗菌活性、热稳定性好，表达量高，且分离纯化简单、易操作，适于大规模工业化生产，该抗菌肽CC313js在医药(抗菌药物)、食品(抗菌剂)、饲料添加剂等领域具有良好的应用前景。

附图说明

图1为重组载体pGAPZαA/CC313js的PCR产物鉴定电泳图；