[发明专利]一种香柚茎尖快繁脱毒的方法

权利要求书

1.一种香柚茎尖快繁脱毒的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)外植体的选择与消毒，在春季或者秋季取香柚块茎在室内发芽，芽长大后定期喷洒杀菌剂，两周后，再次取芽，芽经过35-40℃热处理后放在5％的次氯酸钠溶液处理8-10min，然后在超净台上的解剖镜8-40倍下进行茎尖剥离，选取顶芽的茎尖作为备用；(2)初代培养，将选取的茎尖再次放入5％的次氯酸钠溶液处理3-5min后，放入初代培养基中快速繁殖长大；(3)次代培养，将长大后的茎尖接种在次代培养基上培养，诱导分化为愈伤组织；(4)基本培养，将愈伤组织接种在基本培养基上培养，发育成完整的试管苗；(5)试管苗的脱毒检测；

所述步骤(1)中的杀菌剂为0.1％多菌灵和0.1％链霉素的混合液；

所述初代培养基的组成为：MS培养基+0.1-0.5mg/L的NAA和/或0.1-0.5mg/L的BA，pH为5.6-6.0；

所述次代培养基的组成为：MS培养基+0.1-0.5mg/L的NAA和/或0.1-0.5mg/L的BA+0.6-1.0mg/L的GA，pH为5.6-6.0；

所述基本培养基的组成为：MS培养基+6-BA 0.2-0.5mg/L+NAA 0.2-0.5mg/L+蔗糖28-32g/L+琼脂6-8g/L，pH 5.6-7.0。

2.根据权利要求1所述的一种香柚茎尖快繁脱毒的方法，其特征在于，所述茎尖为顶芽的前端0.3-0.5mm的部分。

3.根据权利要求1或2所述的一种香柚茎尖快繁脱毒的方法，其特征在于，所述茎尖带有1-2个叶原基。

4.根据权利要求1所述的一种香柚茎尖快繁脱毒的方法，其特征在于，所述初代培养的初期的光照强度为1000lx，4周后增加到2000lx，6周后增加到4000lx，培养温度为21-25℃，光照时间为14-18h/d。

5.根据权利要求1所述的一种香柚茎尖快繁脱毒的方法，其特征在于，所述初代培养基、次代培养基和所述基本培养基均是经过巴氏杀毒冷却后再使用的。

6.根据权利要求1所述的一种香柚茎尖快繁脱毒的方法，其特征在于，所述试管苗通过PCR病毒检测方法确定是否含有香柚病毒的。