[发明专利]一种香柚茎尖快繁脱毒的方法

说明书

本发明涉及果树脱毒繁殖技术领域，具体是一种香柚茎尖快繁脱毒的方法，包括以下步骤：(1)外植体的选择与消毒，在春季或者秋季取香柚块茎在室内发芽，芽长大后定期喷洒杀菌剂，两周后，再次取芽，芽经过35‑40℃热处理后放在5％的次氯酸钠溶液处理8‑10min，然后在超净台上的解剖镜8‑40倍下进行茎尖剥离，选取顶芽的茎尖或珠心组织作为备用；(2)初代培养，将选取的茎尖或珠心组织再次放入5％的次氯酸钠溶液处理3‑5min后，放入初代培养基中快速繁殖长大；本发明通过对外植体的灭菌、组培中各阶段培养基及激素的选择，建立一种香柚茎尖快繁脱毒的方法，为香柚组培苗工厂化生产提供理论依据和技术支持，为新品种选育提供一条新途径。

技术领域

本发明涉及果树脱毒繁殖技术领域，具体是一种香柚茎尖快繁脱毒的方法。

背景技术

香柚果营养价值高，味道香甜，是很具有特色的地方特色农产品，种植香柚对增加农民收入，改善人民的生活水平具有十分重要的意义。

黄龙病是柚类的代表性病害，已造成我国数以百万计柚果园的毁灭。对优良品种进行脱毒处理是目前防治这些病害的主要措施。茎尖微芽嫁接脱毒技术主要是利用植物茎尖分生组织无病毒，细胞分裂速度快的原理发展起来的一种快繁脱毒技术。

自从Murashige等提出微体嫁接技术后，引起了各国科研人员的重视。上世纪八十年代以来，发达国家利用茎尖微芽嫁接脱毒技术建立了完整的柑橘良种无病毒苗木繁育体系。我国的柑橘良种无病毒苗木繁育体系建设虽然有一定基础，但不完善，柑橘良种无病毒苗木的生产能力仅能满足需要的5％左右。马凤桐等通过几个柑橘品种的茎尖微芽嫁接，分别成功获得甜橙的微芽嫁接苗，但未对脱毒情况进行检测鉴定。姜玲等通过微芽嫁接得到大量嫁接苗，然后鉴定、证明成功脱除目标病原体。

茎尖微芽嫁接脱毒技术是一种将嫁接和组培相结合的技术，已被证实可以脱除柑橘黄龙病、裂皮病、衰退病、碎叶病等病害。但是，目前，此技术在香柚无毒苗繁殖方面的应用还是一片空白。香柚的繁殖方法主要为高压繁殖和嫁接繁殖，这两种繁殖方式使得病毒极易传播，运用茎尖微芽嫁接脱毒技术应该接能够去除病毒，加快柑橘繁殖速度，缩短生育周期，为生产提供优质种源。

永州香柚种植业的快速发展，使得对脱毒苗的需求越来越大，而香柚茎尖快繁脱毒微芽嫁接技术的建立是解决脱毒苗需求的有效途径。因此，充分利用湖南市香柚种质资源，深入开展香柚茎尖快繁脱毒微芽嫁接技术研究，一方面为香柚种苗工厂化、规模化生产提供理论与技术基础，另一方面也可以为香柚育种、引种及种质保存等提供依据，具有广阔的应用前景。香柚茎尖快繁脱毒微芽嫁接技术的建立，有利于改造香柚传统种植业，提高地区特色农业产品的竞争力。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于克服现有技术的不足，提供了一种香柚茎尖快繁脱毒的方法，通过对外植体的灭菌、组培中各阶段培养基及激素的选择，建立一种香柚茎尖快繁脱毒的方法，为香柚组培苗工厂化生产提供理论依据和技术支持，为新品种选育提供一条新途径。

为解决以上技术问题，本发明现提出以下技术方案：一种香柚茎尖快繁脱毒的方法，包括以下步骤：(1)外植体的选择与消毒，在春季或者秋季取香柚块茎在室内发芽，芽长大后定期喷洒杀菌剂，两周后，再次取芽，芽经过35-40℃热处理后放在5％的次氯酸钠溶液处理8-10min，然后在超净台上的解剖镜8-40倍下进行茎尖剥离，选取顶芽的茎尖或珠心组织作为备用；(2)初代培养，将选取的茎尖或珠心组织再次放入5％的次氯酸钠溶液处理3-5min后，放入初代培养基中快速繁殖长大；(3)次代培养，将长大后的茎尖或珠心组织接种在次代培养基上培养，诱导分化为愈伤组织或者不定芽；(4)基本培养，将愈伤组织或者不定芽接种在基本培养基上培养，发育成完整的试管苗；(5)试管苗的脱毒检测。

进一步的，所述步骤(1)中的杀菌剂为0.1％多菌灵和0.1％链霉素的混合液。

进一步的，所述茎尖或珠心组织为顶芽的前端0.3-0.5mm的部分。