[发明专利]一种基于稳定同位素标记质谱联用技术检测血浆中羧酸类代谢物的方法

权利要求书

1.一种基于稳定同位素标记质谱联用技术检测血浆中羧酸类代谢物的方法，所述方法包含以下步骤：

(1)血浆样品溶液的制备：血浆中加入提取溶液进行提取，涡旋混匀后离心取上层有机相，于氮气下吹干，复溶于乙腈中作为样品溶液备用；

(2)样品溶液的同位素标记：取步骤(1)中的样品溶液与催化剂和激活剂充分混匀后，加入“轻”同位素衍生化试剂反应，反应体系置于-20℃条件下冷冻10min即终止反应，用缓慢氮气流吹干，所得固体样品复溶于乙腈/水(50/50，v/v)中，即得到“轻”同位素标记的衍生化产物；将“轻”同位素衍生化试剂换为“重”同位素衍生化试剂重复上述操作，得到“重”同位素标记的衍生化产物；将“轻”“重”衍生化产物等比例混合均匀，即得待测液；

(3)羧酸类代谢物的非靶向代谢组学分析：取步骤(2)中的待测液进行液相色谱-双中性丢失扫描-质谱分析，根据“轻”“重”衍生化产物的质荷比差异，扫描特定的中性丢失片段，结合保留时间与质谱信号强度进行筛选，找出潜在的羧酸类代谢物。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述提取溶液包含提取剂和/或0.5％的甲酸；优选地，所述提取剂选自乙酸乙酯、乙腈、甲苯、氯仿和正己烷中的一种或多种，优选为乙酸乙酯；

优选地，所述提取剂与0.5％的甲酸的体积比为30：1。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述催化剂为有机碱，优选为三乙胺；

优选地，所述催化剂的浓度为1～20μmol/mL，优选为2～10μmol/mL，更优选为2～5μmol/mL，最优选为2μmol/mL；

优选地，步骤(2)中，所述激活剂为2-氯-1-甲基碘化吡啶鎓；

优选地，所述激活剂的浓度为30～240μmol/mL，优选为120～240μmol/mL，更优选为120μmol/mL；

优选地，步骤(2)中，所述的“轻”同位素衍生化试剂为N,N-二甲基乙二胺，所述的“重”同位素衍生化试剂为d₄-N,N-二甲基乙二胺；

优选地，所述“轻”或“重”同位素衍生化试剂的浓度为10～80μmol/mL，优选为40～80μmol/mL，最优选为60μmol/mL；

优选地，步骤(2)中，所述激活剂与“轻”或“重”同位素衍生化试剂的摩尔比为1：0.5-4，优选为1：0.5-1，更优选为1：1；

优选地，步骤(2)中，所述催化剂、激活剂与“轻”或“重”衍生化试剂的体积比为1-2.5：1：0.5-1；优选为1：1：2；

优选地，步骤(2)中，所取用的样品溶液与“轻”或“重”衍生化试剂的体积比为10-13：1，优选为10：1；

优选地，步骤(2)中，所述衍生化反应的条件为在20～60℃优选50～60℃下振荡0.5～3小时优选1.5～3小时，优选为50℃下振荡2小时。