[发明专利]一种壳聚糖或壳聚糖盐中蛋白质含量的测定方法

权利要求书

1.一种壳聚糖或壳聚糖盐中蛋白质含量的测定方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将库马斯亮蓝溶解于体积百分比浓度为95％的乙醇溶液中，加入浓盐酸，库马斯亮蓝G-250与浓盐酸的质量体积比为2:1，单位为mg/ml，蒸馏水稀释至库马斯亮蓝浓度为100mg/L，盐酸质量百分比终浓度为1.85％，制得库马斯亮蓝G-250试液；

(2)称取103～107℃干燥至恒重的壳聚糖或壳聚糖盐样品，溶解于质量百分比浓度为1％的醋酸溶液中，混合均匀，超声波处理15min，然后沸水浴中处理25～35min，制得浓度为5mg/ml的样品溶液；

(3)配制不同浓度的蛋白质标准溶液，加入步骤(1)制得库马斯亮蓝G-250试液，测定595nm处各标准溶液的吸光度，绘制吸光度---浓度曲线；

(4)向步骤(2)制得的样品溶液中加入步骤(1)制得库马斯亮蓝G-250试液，测定样品溶液在595nm处的吸光度，计算样品中蛋白质含量。

2.如权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述步骤(2)中，超声波处理条件为：温度20～24℃，频率35～45kHz，功率为400～500W。

3.如权利要求2所述的测定方法，其特征在于，所述步骤(2)中，超声波处理条件为：温度22℃，频率40kHz，功率为500W。

4.如权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述步骤(3)中，不同浓度的蛋白质标准溶液采用如下步骤配制：

(i)精确吸取5％牛血清白蛋白标准液0.6mL，蒸馏水稀释定容至1000mL，制得浓度为30μg/mL的蛋白质标准溶液；

(ii)分别取步骤(i)配制的浓度为30μg/mL的蛋白质标准溶液0ml、0.1ml、0.2ml、0.4ml、0.8ml、1.0ml，然后分别加入质量百分比浓度为1％的醋酸溶液1.0ml、0.9ml、0.8ml、0.6ml、0.2ml、0ml，制得蛋白质浓度为0ug/mL、3ug/mL、6ug/mL、12ug/mL、24ug/mL、30ug/mL的蛋白质标准溶液。

5.如权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述步骤(4)中，库马斯亮蓝G-250试液的添加量为每毫升蛋白质样品溶液添加5ml库马斯亮蓝G-250试液。

6.如权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述步骤(4)中，计算样品中蛋白质含量的步骤如下：

将测定样品溶液在595nm处的吸光度值代入步骤(3)中的吸光度---浓度曲线，计算获得样品蛋白质浓度ρ₂，代入下式，计算获得样品中蛋白质含量ρ₃；

式中：

ρ₁——样品溶液中壳聚糖或壳聚糖盐浓度，单位为微克每毫升，

ρ₂——样品溶液中蛋白质浓度，单位为微克每毫升。