[发明专利]一种标记β-D葡聚糖的结合蛋白及其纯化合成方法在审
| 申请号： | 201810377374.3 | 申请日： | 2018-04-25 |
| 公开（公告）号： | CN108531499A | 公开（公告）日： | 2018-09-14 |
| 发明（设计）人： | 咸涛 | 申请（专利权）人： | 江苏诺鬲生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C07K16/14;G01N33/569 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 225300 江苏省泰州市中国医*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 葡聚糖 结合蛋白 高表达 表达菌株 蛋白纯化 合成 菌株 筛选 真菌细胞壁 表达载体 菌株筛选 免疫亲和 目的蛋白 阳性菌株 载体系统 准确标记 菌落 抗原 真菌 构建 洗脱 转化 诱导 验证 试验 优化 | ||
1.一种能够标记真菌细胞壁成份β-D葡聚糖的结合蛋白，其特征在于其中包括载体系统转化及对表达菌株的优化诱导表达及菌株筛选后的大量纯化，所述载体序列为PTXB1 大肠杆菌表达载体，所述表达菌株为BL21(DE3)大肠杆菌。
2.如权利要求1所述的一种能够标记真菌细胞壁成份β-D葡聚糖的结合蛋白及其纯化合成方法，其特征在于所述转化所用的载体系统PTXB1。
3.如权利要求1所述的一种能够标记真菌细胞壁成份β-D葡聚糖的结合蛋白及其纯化合成方法，其特征在于所述载体系统转化后的表达菌株BL21(DE3)大肠杆菌进行优化诱导表达。
4.如权利要求1所述的一种能够标记真菌细胞壁成份β-D葡聚糖的结合蛋白及其纯化合成方法，其特征在于所述转化表达条件为37 ℃，220 rpm 摇床震荡培养，待 OD600=0.4-0.6 之间时，加入终浓度为 0.5 mM 的 IPTG， 18 ℃诱导表达 10 h。
5.如权利要求1所述的一种能够标记真菌细胞壁成份β-D葡聚糖的结合蛋白及其纯化合成方法，其特征在于优化诱导表达后，通过SDS-PAGE进行的目的蛋白的确认表达。
6.如权利要求1所述的一种能够标记真菌细胞壁成份β-D葡聚糖的结合蛋白及其纯化合成方法，其特征在于所述目的蛋白确认后的高表达菌株的培养，培养基为沙保罗琼脂培养基。【配法】麦芽糖40g,，蛋白胨10g，琼脂20g，蒸馏水1L。将上述成分溶于水，加热溶解，调pH至6.0±0.2，分装三角瓶或试管中，118℃灭菌15min，倾注平板或置斜面，无菌试验后备用。
7.如权利要求1所述的一种能够标记真菌细胞壁成份β-D葡聚糖的结合蛋白及其纯化合成方法，其特征在于所述大量培养后依照优化诱导表达方法进行大量诱导表达进行纯化。
8.如权利要求1所述的一种能够标记真菌细胞壁成份β-D葡聚糖的结合蛋白及其纯化合成方法，其特征在于所述纯化后的蛋白与真菌细胞壁成份β-D葡聚糖进行结合标记，抗体蛋白标记后添加双三嗪氨基二苯乙烯类型荧光增白剂观测标记结果。
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