[发明专利]一种苹果矮化砧M9T337组织培养量产方法

权利要求书

1.一种苹果矮化砧M9T337组织培养用培养基组合物，其特征在于，所述培养基组合物包括初代培养基、第一型继代培养基、第二型继代培养基和生根培养基；具体而言：

初代培养基：以MS为基本培养基，附加有：6-BA 0.5～1.3mg/L、IBA 0.5～1.3mg/L、蔗糖20～40 g/L、琼脂5～7 g/L；

第一型继代培养基：以改良MS为基本培养基，附加有：蔗糖30～50 g/L、琼脂5～7 g/L，6-BA 0.1～0.5 mg/L、IBA 0.3～0.8mg/L；

第二型继代培养基：以改良MS为基本培养基，附加有：蔗糖30～50 g/L、琼脂5～7 g/L，6-BA 0.5～1.0 mg/L、IBA 0.3～0.8mg/L；

生根培养基，以MS为基本培养基，其中大量元素减半，附加有：IBA 0.3～0.8mg/L， IAA0.3～0.8 mg/L、蔗糖20～40 g/L、琼脂5～7 g/L。

2.如权利要求1所述苹果矮化砧M9T337组织培养用培养基组合物，其特征在于，所述培养基组合物具体为：

初代培养基：以MS为基本培养基，附加有：6-BA 1.3mg/L、IBA 0.5mg/L、蔗糖40 g/L、琼脂6 g/L；

第一型继代培养基：以改良MS为基本培养基，附加有：蔗糖30 g/L、琼脂6 g/L， 6-BA0.2 mg/L、IBA 0.4mg/L；

第二型继代培养基：以改良MS为基本培养基，附加有：蔗糖30g/L、琼脂6 g/L，6-BA0.8mg/L、IBA 0.4mg/L；

生根培养基：以MS为基本培养基，其中大量元素减半，附加有：IBA 0.6mg/L， IAA0.5mg/L、蔗糖20 g/L、琼脂6 g/L。

3.利用权利要求1所述苹果矮化砧M9T337组织培养用培养基组合物的苹果矮化砧M9T337组织培养量产方法，其特征在于，该方法具体包括如下步骤：

（1）初代培养：

以苹果矮化砧木M9T337带腋芽茎段为外植体，灭菌后利用初代培养基进行初代培养，培养25~35天左右至形成若干不定芽丛；

（2）继代培养：

切取步骤（1）中初代培养后的不定芽丛，转接至继代培养基上，进行继代扩繁培养；

继代培养时，先在第二型培养基中继代培养三个周期后，再在第一型继代培养基中继代培养一个周期；

每个周期的时长为25~35天；

（3）生根、炼苗：

切取步骤（2）中继代培养后生长健壮的单芽幼苗，接种到生根培养基上，诱导生根并进行生根炼苗培养；

具体生根炼苗培养时，根诱导的培养条件为：光照强度1500～4000Lx，光照时间6～12h/d；生根炼苗时环境条件为：温度25～30℃，光照强度为5000～10000Lx，光照时间为自然光照时长；

（4）移栽：

将步骤（3）中生根、炼苗后组培幼苗，进行移栽育苗。

4.如权利要求3所述苹果矮化砧M9T337组织培养量产方法，其特征在于，步骤（3）中，生根培养时，培养条件为：温度为26±2℃，光照时间为8 h/d，光照强度为3000～4000Lx。

5.如权利要求3所述苹果矮化砧M9T337组织培养量产方法，其特征在于，步骤（2）中，每个周期的时长为30天。

6.如权利要求3所述苹果矮化砧M9T337组织培养量产方法，其特征在于，步骤（1）的初代培养、步骤（2）的继代培养过程中，培养条件均为：温度为26±2℃，光照强度1500～2000Lx，光照时间7 h/d。

7.如权利要求3所述苹果矮化砧M9T337组织培养量产方法，其特征在于，步骤（3）中，生根培养与炼苗环节相结合进行，具体而言：

接种生根培养基后，先培养8～20 d进行诱导生根培养，然后将诱导后的幼苗置于外界环境中培养10～22 d继续生长，以适应外界环境。