[发明专利]体外活化记忆性B细胞成浆细胞的方法

说明书

本发明属于B细胞的培养或维持技术领域，具体涉及一种体外活化记忆性B细胞成浆细胞的方法，包括以下步骤：用丝裂霉素C处理的NIH‑3T3/mCD40L细胞作为饲养层细胞，10%‑20%FBS的IMDM作为基础培养基，以CpG、IL‑2和IL‑21作为诱导剂，在体外诱导记忆性B细胞转化为浆细胞并分泌抗体。该方法能够显著提高活化效率，提高活化质量；该方法工艺简单，成本低。

技术领域

本发明属于B细胞的培养或维持技术领域，具体涉及一种体外活化记忆性B细胞成浆细胞的方法。

背景技术

记忆性B细胞是初次免疫应答后，B细胞被抗原激活分化的具有记忆功能的一种能持续存在的重要免疫细胞。当再次遇到相同抗原时，记忆性B细胞能迅速增殖分化为浆细胞，产生高亲和力的特异性抗体，从而介导体液免疫应答，帮助机体抵御抗原的再次入侵。记忆性B细胞可长期存在体内，在抗体药物研究中发挥着重要作用。目前，记忆性B细胞的分离方法相对成熟，但体外激活方法繁琐，成本高，激活率低，难以推广。因此，如何高效在体外将记忆性B细胞转化为浆细胞成为研究热点。

2002年，Bernasconi等发现CpG和IL-15共同作用可促进记忆性B细胞分化并增值(Maintenance of serological memory by polyclonal activation of human memory Bcells,Bernasconi N L,et al.,Science,2002,298(5601):2199-2202)。2004年，Cortty等利用CpG、PWM和葡萄球菌A蛋白活化了记忆性B细胞(Tracking human antigen-specificmemory B cells:a sensitive and generalized ELISPOT system,Crotty S,et al.,Journal of Immunological Methods,2004,286(1–2):111-122)。2007年，Ertesvag等发现维生素A酸可以增强CpG介导的CD27+记忆性B细胞的增值(Vitamin A potentiates CpG-mediated memory B-cell proliferation and differentiation:involvement of earlyactivation of p38MAPK,Ertesvag A,et al,Blood,2007,109(9):3865-72)。2009年，Pinna等发现R848、IL-2和CD40L稳转细胞可以活化记忆性B细胞(Clonal dissection ofthe human memory B-cell repertoire following infection and vaccination,PinnaD,et al.,European Journal of Immunology,2009,39(5):1260–1270)。2011年，Wand等利用活化的树突状细胞和T细胞诱导了记忆性B细胞活化为浆细胞并成功表达抗体(Cooperation of dendritic cells with native lymphocyte populations to inducethe generation of antigen-specific antibodies in vitro,Wand I,et al.,Journalof Biotechnology,2011,156(3):173-181)；同时,恩德尔等人利用IL-1β、TNF-α、金黄色葡萄球菌Cowans菌株细胞、BAFF、IL-2、IL-10、IL-6及IL-4在体外活化了基因性B细胞(CN102918395B)。2014年，陈廷涛等利用CpG、IL-2、IL-10、B95-8细胞培养上清成功诱导记忆性B细胞转化为浆细胞(CN104031880A)。2016年，胡萍等利用IL-2I、L-21及辐照灭活的3T3-CD40L细胞体外诱导记忆B细胞活化成浆细胞并分泌抗体(CN106222137A)。这些方法都不同程度的活化了记忆性B细胞，但均存在工艺复杂，成本高等缺陷。其中，以胡萍等的方法最为方便简单，但是其活化效率不高，活化质量较低。

发明内容