[发明专利]一种壳聚糖酶细胞表面展示体系及其制备和应用

权利要求书

1.一种壳聚糖酶细胞表面展示体系，其特征在于：将编码壳聚糖酶的基因csn和负责跨膜转运及锚定功能的冰核蛋白N端结构域的基因inaQN融合得到融合后的基因片段，将融合后的基因片段表达在宿主细胞表面，得到壳聚糖酶细胞表面展示体系；所述的基因csn的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述的基因inaQN的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.根据权利要求1所述的一种壳聚糖酶细胞表面展示体系，其特征在于：所述编码壳聚糖酶的基因csn来源于枯草芽孢杆菌，所述宿主细胞为大肠杆菌宿主菌。

3.权利要求1所述的一种壳聚糖酶细胞表面展示体系的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

1）将SEQ ID NO：1所示的编码壳聚糖酶的基因csn和SEQ ID NO：2所示的负责跨膜转运及锚定功能的冰核蛋白N端结构域基因inaQN融合，得到融合后的基因片段；

2）验证融合后的基因片段的序列；

3）将经验证的融合后的基因片段插入IPTG诱导型表达质粒中，得到重组的IPTG诱导型表达质粒；

4）将重组的IPTG诱导型表达质粒转化入宿主菌，使得含有所述重组的IPTG诱导型表达质粒的宿主菌成为所述重组壳聚糖酶细胞表面展示体系；

5）在IPTG诱导下所述重组壳聚糖酶展示在所述宿主菌的表面。

4.根据权利要求3所述的一种壳聚糖酶细胞表面展示体系的制备方法，其特征在于：步骤3)中所述的IPTG诱导型表达质粒是指含有乳糖操纵子的IPTG诱导型表达质粒。

5.根据权利要求3所述的一种壳聚糖酶细胞表面展示体系的制备方法，其特征在于：所述宿主菌为大肠杆菌DH5α、BL21或JM109。

6.根据权利要求3所述的一种壳聚糖酶细胞表面展示体系的制备方法，其特征在于：步骤5)中所述IPTG诱导的具体步骤为：

(I) 将含有所述重组的IPTG诱导型表达质粒的宿主菌接种于培养基中，在28-37℃下震荡培养10-14h；

(II) 将步骤(I)中的细菌培养物以培养基体积的1-10%接种量转接于新鲜培养基中，在28-37℃下震荡培养；

(III) 待步骤(II)中的细菌培养液OD₆₀₀为0.6-0.9时，在培养液中加入IPTG，使IPTG的终浓度在0.2-1.5mM，继续震荡培养至培养液OD₆₀₀为1.7-1.9；

(IV) 收集步骤(III)中培养液中的细胞，重悬至磷酸盐缓冲液中保存于1-4℃即可。

7.权利要求1所述的壳聚糖酶细胞表面展示体系在制备低分子量壳聚糖和壳寡糖中的应用。