[发明专利]一种具有肿瘤靶向性的重组痘苗病毒及其制备方法、用途

说明书

本发明公开了一种具有肿瘤靶向性的重组痘苗病毒及其制备方法、用途，该重组痘苗病毒包括将胞嘧啶脱氨酶基因序列插入痘苗病毒的基因组中得到的能够表达胞嘧啶脱氨酶蛋白的重组痘苗病毒，所述痘苗病毒为天坛株广9，所述胞嘧啶脱氨酶基因编码的是酵母胞嘧啶脱氨酶，胞嘧啶脱氨酶基因序列如SEQ ID NO：1所示。本发明提供的重组痘苗病毒能够大量表达胞嘧啶脱氨酶蛋白，且表达的胞嘧啶脱氨酶蛋白活性高，能够有效将5‑FC前体转变为化疗药物5‑FU。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种具有肿瘤靶向性的重组痘苗病毒及其制备方法、用途。

背景技术

随着肿瘤发病机制在基因水平的认识，以及分子克隆和基因转移技术的日趋完善，基因治疗作为一种治疗手段日益被临床接受，并进行了大量的新药临床研究。基因治疗包含两个基本要素，一是载体系统，二是导入载体中的治疗基因。当选择病毒载体作为基因治疗的候选时，病毒载体的安全性和选择性是主要关注的问题。

胞嘧啶脱氨酶(CD)是存在于细菌和真菌中的一种代谢酶，哺乳类细胞不含该酶。此酶可将无毒性的抗生素前体药物5-氟胞嘧啶(5-flucytosine，5-FC)转变为细胞毒性的化疗药物5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil，5-FU)，从而导致肿瘤细胞的杀伤。中国专利CN102227501A公开了一种重组的可复制型哺乳动物致癌反转录病毒载体，包含分离的多核苷酸，该分离的多核苷酸插入了至pAC3中，其中该分离的多核苷酸包含编码胞嘧啶脱氨酶的序列。该反转录病毒载体能够转化宿主细胞表达胞嘧啶脱氨酶，但是该病毒载体无法特异性的识别肿瘤细胞，在具有肿瘤细胞的部位表达释放胞嘧啶脱氨酶，对肿瘤的杀伤能力差。

发明内容

因此，本发明要解决的技术问题是现有技术中病毒载体无法特异性识别肿瘤细胞，不能实现靶向肿瘤进行释放药物的问题，进而提供一种具有肿瘤靶向性的重组痘苗病毒及其制备方法、用途。

为解决上述技术问题，本发明提供一种重组痘苗病毒，包括将胞嘧啶脱氨酶基因序列插入痘苗病毒的基因组中得到的能够表达胞嘧啶脱氨酶蛋白的重组痘苗病毒。

优选的，所述痘苗病毒为天坛株广9。

优选的，所述天坛株广9的TK区域缺失。

优选的，所述胞嘧啶脱氨酶基因编码的是酵母胞嘧啶脱氨酶。

优选的，所述胞嘧啶脱氨酶基因序列进行了氨基酸优化。

优选的，所述胞嘧啶脱氨酶基因序列如SEQ ID NO：1所示。

优选的，所述痘苗病毒的TK区替换为胞嘧啶脱氨酶基因序列。

本发明还提供一种用于基因治疗的产品，包含上述重组痘苗病毒。优选的，所述产品还包括5-氟胞嘧啶；优选的，所述产品还包括药物学可接受载体、稀释剂、佐剂和/或添加剂。

优选的，所述产品为药物、试剂、宿主细胞或试剂盒。

本发明还提供上述重组痘苗病毒或用于基因治疗的产品在制备治疗肿瘤药物中的用途。

优选的，所述肿瘤包括肺腺癌、结肠癌、肝癌、胃癌、乳腺癌、前列腺癌、表皮癌、宫颈癌、胶质瘤或黑色素瘤。

本发明还提供一种制备上述重组痘苗病毒的方法，将胞嘧啶脱氨酶基因插入痘苗病毒的基因组中。

优选的，包括如下步骤：

S1：将胞嘧啶脱氨酶基因连接在穿梭载体TK同源的左右两臂之间，备用；

S2：通过同源重组将所述穿梭载体中连接的胞嘧啶脱氨酶基因整合到痘苗病毒基因组的TK区中，即得到既能够表达胞嘧啶脱氨酶蛋白又具有肿瘤靶向能力的痘苗病毒载体。

本发明技术方案具有如下优点：