[发明专利]一种基于PRET的磷光探针定量检测凝血酶的方法

权利要求书

1.一种基于PRET的磷光探针定量检测凝血酶的方法，其特征在于按如下的步骤进行：

（1）制备的磷光QDs材料均匀分散在水溶液中配制成浓度为500 mg/L的溶液作为检测体系，并使用315 nm作为激发波长，测试体系在590 nm处的磷光发射峰；所述的磷光QDs材料指的是MPA包覆的Mn掺杂ZnS量子点；

（2）将TBA-BHQ2溶液加入到步骤（1）的溶液中并混合均匀，静置以确保两者的相互作用，从而形成QDs/TBA-BHQ2复合物溶液，其中TBA-BHQ2的浓度0.1 μmol/L；

（3）待测凝血酶溶液TB加入到步骤（2）的复合物溶液中并混合均匀，静置以确保分析物与QDs/TBA-BHQ2复合物相互作用，以形成TB/TBA-BHQ2复合物；

（4）步骤（2）对磷光量子点探针的磷光进行猝灭，步骤（3）对量子点的磷光进行恢复，并以步骤（1）的检测条件分别对步骤（2）和步骤（3）中形成的复合溶液进行检测，得到磷光恢复响应值，检测样品中凝血酶的浓度；

（5）分别将不同生物分子加入加到步骤（2）所得到QDs/TBA-BHQ2复合物溶液中，混合均匀，静置待反应体系稳定后，进行磷光测试，考察其选择性识别能力；所述的不同生物分子指的是L-半胱氨酸、甘氨酸、L-组氨酸、L-亮氨酸、L-蛋氨酸、L-苏氨酸或溶菌酶。

2.权利要求1所述的基于PRET的磷光探针定量检测凝血酶的方法，其中所述凝血酶样品须溶解于自制生理盐水中，自制生理盐水配方为：称取0.8克氯化钠，溶解在少量高纯水中，稀释到100毫升，高纯水须用0.45 μm水系膜过滤。

3.按权利要求1或权利要求2所述的基于PRET的磷光探针定量检测凝血酶的方法，在水溶液样品中检测凝血酶的线性范围0.08-7.5 nmol/L，检出限为0.023nmol/L。