[发明专利]前列腺癌干细胞标志物、抗体OV6在制备前列腺癌干细胞标记材料中的应用及标记方法

说明书

本发明涉及医药技术研究领域，提出了前列腺癌干细胞标志物、抗体OV6在制备前列腺癌干细胞标记材料中的应用及标记方法。本发明的标记方法用小鼠源性OV6抗体标记前列腺癌细胞系或前列腺癌组织细胞；然后与大鼠抗小鼠IgG、磁性微珠一起孵育；接着置于MACS MS柱上进行过滤分离，得到OV6阳性前列腺癌细胞；最后，采用流式细胞术检测OV6阳性前列腺癌细胞标记效率。进一步地，在用小鼠源性OV6抗体标记前，用恩杂鲁胺进行药物刺激，以增强标记效果。本发明能够对前列腺癌干细胞进行显著标记，OV6阳性细胞具有高表达干性相关基因，高成球率和高成瘤率。本发明的标记方法具有较高的特异性和敏感性，具有重要的临床价值。

技术领域

本发明涉及医药技术研究领域，特别涉及前列腺癌干细胞标志物、抗体OV6在制备前列腺癌干细胞标记材料中的应用及标记方法。

背景技术

前列腺癌(Prostate Cancer,PCa)是仅次于肺癌的发病率最高的肿瘤之一，特别在发达国家的男性中，前列腺癌已成为发病率最高的肿瘤。据2015年公布的全球数据估计，每年新发前列腺癌患者达111.2万人，30.8万人死于前列腺癌。相对西方国家，亚洲地区前列腺癌的发病率和病死率较低，在中国，前列腺癌的发病率及病死率远低于世界平均水平。然而，研究数据表明，中国的前列腺癌发病率正在逐年攀升，前列腺癌的发病率在近30年间增长了将近6倍，死亡人数则从每年约6000人上升到每年近1.8万人，增长幅度超过了200％，并且新发晚期前列腺癌的比例接近30％，远远高于世界平均水平。另一项2015年的研究调查显示，中国每年前列腺癌新发病例超过6万人，新增死亡病例估计在2.66万人。因此，前列腺癌不仅是世界范围内重要的健康问题，在我国，因其发病率和死亡率增长之迅速，以及晚期前列腺癌的高发比例，前列腺癌亦成为威胁国民健康的重要问题之一。

肿瘤干细胞被认为是癌症复发、转移的主要原因，癌症治疗中以肿瘤干细胞为靶标的重要性已被指出。但是肿瘤组织中肿瘤干细胞比率较低，特异性识别肿瘤干细胞并进行治疗是极其困难的。肿瘤干细胞的检测技术以及以肿瘤干细胞为靶标的新疗法的开发已成为癌症医疗中的重要课题。目前，作为已知的肿瘤干细胞标记，有CD133、CD24、CD44等分子标记，据说仅在极少数癌细胞中具有有效性，为了在更多种类的癌症中检测肿瘤干细胞，需要鉴定新的分子标记。目前前列腺癌干细胞的标志物主要包括CD133、CD44、整合素α2β1等，但是，一方面，他们表征的前列腺癌细胞是否属于前列腺癌干细胞还存在争议，有研究报道，隐藏在CD44⁺α2β1^hi下的CD133^-细胞才是肿瘤起始细胞，另一方面，这些标志物在多数前列腺癌细胞系和组织中的表达丰度存在较大差异，这些都大大影响了前列腺癌干细胞研究的深入和临床应用的探索。

发明内容

本发明一方面提供了一种前列腺癌干细胞标志物，标志物为抗体OV6。

本发明另一方面提供了抗体OV6在前列腺癌干细胞标志材料中的应用。

本发明还提供了一种利用OV6作为标志物对前列腺癌干细胞进行标记的方法，包括以下步骤：

a.利用MiniMACS TM Cell Sorter(Miltenyi Biotec，Bergisch Gladbach，Germany)进行磁激活细胞分选(MACS)，具体为用小鼠源性OV6抗体标记前列腺癌细胞系或前列腺癌组织细胞30分钟；

b.将OV6抗体标记的前列腺癌细胞系或前列腺癌组织细胞，与大鼠抗小鼠IgG、磁性微珠一起孵育；

c.将孵育后的体系置于MACS MS柱(Miltenyi Biotec，Bergisch Gladbach，德国)上进行过滤分离，得到OV6阳性前列腺癌细胞，即为前列腺癌干细胞。