[发明专利]一种用于检测芒果疮痂病病原菌的特异性引物及巢式PCR检测方法

权利要求书

1.一种用于检测芒果疮痂病病原菌的特异性引物，其特征在于，包括上游引物P1和下游引物P2，所述P1和P2的序列为：

P1:5′-CCCACCCTTTGCTGTTGCG-3′；

P2:5′-AAGGCCCCGCGTTTTCG-3′。

2.根据权利要求1所述的一种用于检测芒果疮痂病病原菌的特异性引物，其特征在于，所述引物P1和P2对芒果疮痂病病原菌特异性扩增出488bp的产物。

3.一种利用权利要求1所述引物检测芒果疮痂病病原菌的巢式PCR方法，其特征在于，包括以下步骤：以待测样品的DNA为模板，采用通用引物ITS1/ITS4进行第一轮PCR扩增，将PCR产物稀释50-100倍，再用权利要求1所述的特异性引物P1和P2进行第二轮PCR扩增，反应结束后对扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳分析，根据扩增产物的大小判定结果，如果能特异性地扩增出488bp的产物，即判定样品中存在芒果疮痂病病原菌。

4.根据权利要求3所述的检测芒果疮痂病病原菌的巢式PCR方法，其特征在于，所述待测样品为芒果疮痂病病原菌或者疑似感染了芒果疮痂病病原菌的植物组织。

5.根据权利要求3所述的检测芒果疮痂病病原菌的巢式PCR方法，其特征在于，第一轮PCR扩增的反应体系为：2.5μL的10×PCR缓冲液，0.5μL浓度为5U/μL的Taq DNA聚合酶，1μL的引物ITS1，1μL的引物ITS4，2.0μL的dNTPs，1μL的模板DNA，用ddH₂O补足至25μL；第二轮PCR扩增的反应体系为：2.5μL的10×PCR缓冲液，0.5μL浓度为5U/μL的Taq DNA聚合酶，1μL的引物P1，1μL的引物P2，2.0μL的dNTPs，1μL的PCR产物，用ddH₂O补足至25μL。

6.根据权利要求3所述的检测芒果疮痂病病原菌的巢式PCR方法，其特征在于，第一轮PCR扩增的反应程序为：95℃预变性3min；95℃变性45s，55℃退火45s，72℃延伸1min，共35个循环；最后72℃延伸10min；4℃保存；第二轮PCR扩增的反应程序为：95℃预变性3min；95℃变性45s，58℃退火45s，72℃延伸1min，共35个循环；最后72℃延伸10min；4℃保存。