[发明专利]一种噬菌体ФX174裂解蛋白E及其应用

说明书

本发明公开了一种噬菌体ФX174裂解蛋白E及其应用，属于遗传工程领域。本发明是以重组大肠杆菌E.coli(PAI/GroELS)作为出发菌株，通过引入噬菌体ФX174裂解蛋白E，在重组大肠杆菌细胞表面产生孔洞，再利用细胞内外渗透压差，从而将亚油酸异构酶从细胞中释放出来的方法。最后经过对释放条件优化，使细胞内81％的亚油酸异构酶被释放出重组大肠杆菌细胞。

技术领域

本发明涉及一种噬菌体ФX174裂解蛋白E及其应用，属于遗传工程领域。

背景技术

共轭亚油酸(Conjugated linoleic acid，CLA)是一种具有共轭双键的亚油酸(linoleic acid，LA)同分异构体，这些共轭双键始于碳9、11或10、12位，是一种普遍存在于人体或动物体的营养元素。CLA是一种新发现的营养元素，目前在欧美的健康食品界，几乎成为预防现代疾病的灵丹妙药，已经被这些国家开发成为食品添加剂、保健品和营养饲料。动物体和人体的研究表明，CLA具有多种生理功能，包括清除自由基、抑制肿瘤细胞扩散、防止动脉粥硬化、调节免疫系统和控制脂质积累等。目前，共轭亚油酸主要是通过化学方法合成，不仅造成了严重的化工污染，而且合成得到的是多种结构共轭亚油酸的混合物，下游分离成本十分高昂。最近几年，研究的焦点逐渐转移到利用生物法合成专一的共轭亚油酸上来了。

目前，利用生物法合成专一性共轭亚油酸的方法是将来源于痤疮丙酸杆菌的亚油酸异构酶在其它宿主中异源表达，再用重组菌直接催化生产共轭亚油酸或者提取胞内表达的酶，用酶催化共轭亚油酸的生产。其中以大肠杆菌为宿主构建工程菌生产亚油酸异构酶时，重组亚油酸异构酶定位在重组大肠杆菌的细胞质中，为了获得胞内酶需要将细胞破碎，此过程极大的增加了工业化生产共轭亚油酸的成本。因此，开发简便高效的亚油酸异构酶提取方法成为利用生物酶法生产共轭亚油酸的关键技术之一。

噬菌体ФX174裂解蛋白E是一种来源于噬菌体的小分子蛋白，其能够融合革兰氏阴性菌的内外膜，并在细胞膜上形成大小为40～200nm的空洞。细胞质中的物质在内外渗透压差的作用下，被排出细胞。目前，噬菌体ФX174裂解蛋白E已经被应用于免疫领域制备细胞菌影和用于蛋白领域用于回收高纯度的包涵体。

发明内容

本发明提供了一种利用噬菌体ФX174裂解蛋白E释放PAI的方法，能够使重组大肠杆菌中81％的亚油酸异构酶被释放到胞外环境中。

本发明的第一个目的是提供一种噬菌体ФX174裂解蛋白E，其氨基酸序列如SEQID NO.1所示。

本发明的第二个目的是提供编码所述噬菌体ФX174裂解蛋白E的基因。

在本发明的一种实施方式中，所述基因含有SEQ ID NO.2所示的序列。

本发明的第三个目的是提供携带所述噬菌体ФX174裂解蛋白E的载体或细胞。

在本发明的一种实施方式中，所述载体包括pBV220。

本发明的第四个目的是提供所述噬菌体ФX174裂解蛋白E在食品、生物领域的应用。

本发明的第五个目的是提供一种提高微生物蛋白释放率的方法，其特征在于，在所述微生物细胞中共表达噬菌体ФX174裂解蛋白E，所述噬菌体ФX174裂解蛋白E含有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。

在本发明的一种实施方式中，所述微生物包括革兰氏阴性细菌，例如大肠杆菌。

在本发明的一种实施方式中，所述方法用于提高酶(PAI)的可溶性表达量。