[发明专利]一种简单快速的芽孢分离纯化方法

权利要求书

1.一种简单快速的芽孢分离纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)将含芽孢和细菌菌体的混悬液收集到无菌的离心容器中；

2)分散粘连在一起的细菌菌体和芽孢并使其悬浮于混悬液中；使芽孢和细菌菌体沉淀于所述离心容器底部，分别形成芽孢沉淀层和细菌菌体沉淀层；移除上清液；

3)再缓慢加入适量的悬浮介质，以不破坏所述芽孢沉淀层为准；使细菌菌体重新悬浮于所述悬浮介质中而芽孢沉淀层保持完整；移除上层含细菌菌体的悬浮液；

4)向所述离心容器内重新加入适量的悬浮介质；

5)重复步骤2)-4)，直至所述芽孢沉淀层中芽孢纯度满足要求。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)采用振荡的方法分散粘连在一起的细菌菌体和芽孢并使其悬浮于混悬液中；振荡速度优选为0-200rpm，更优选为150-200rpm。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤2)采用离心方法使芽孢和细菌菌体沉淀于离心容器底部，由下到上分别形成芽孢沉淀层和细菌菌体沉淀层；优选地，离心转速为0-60000g，更优选为700-24000g。

4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，所述悬浮介质包括水、悬凝剂溶液、密度梯度分离液或其他任何可以将细菌菌体悬浮于其中的介质；优选为0-4℃无菌蒸馏水。

5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于，采用振荡或磁力搅拌的方法，使离心容器中的悬浮介质形成涡旋，冲刷细菌菌体沉淀层，使细菌菌体剥离并悬浮于悬浮介质中；优选地，当芽孢沉淀层开始裸露时，立即停止振荡或磁力搅拌，以保持芽孢沉淀层的完整性；更优选地，所述振荡或磁力搅拌转速为0-10000rpm，更佳为50-1500rpm。

6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)将含芽孢和细菌菌体的混悬液收集到无菌的离心容器中，置于振荡培养箱中振荡；

2)分散粘连在一起的细菌菌体和芽孢并使其悬浮于混悬液中；振荡条件：振荡速度：0-200rpm，振荡时间0-90min，温度：0-4℃；

然后离心，使芽孢和细菌菌体沉淀于离心容器底部，分别形成芽孢沉淀层和细菌菌体沉淀层；移除上清液；离心条件：离心转速：0-60000g，离心时间0-200min，温度：0-4℃；

3)再缓慢加入适量的悬浮介质，以不破坏所述芽孢沉淀层为准；振荡或磁力搅拌，使离心容器中的悬浮介质形成涡漩，冲刷细菌菌体沉淀层，使细菌菌体逐渐剥离并悬浮于悬浮介质中，当芽孢沉淀层开始裸露时，立即停止振荡或磁力搅拌，使细菌菌体重新悬浮于所述悬浮介质中而芽孢沉淀层保持完整；移除上层含细菌菌体的悬浮液；所述振荡或磁力搅拌速度为0-10000rpm；

4)向所述离心容器内重新加入适量的悬浮介质；

5)重复步骤2)-4)，直至所述芽孢沉淀层中芽孢纯度满足要求。

7.根据权利要求1-6任一项所述的方法，其特征在于，所制备的芽孢悬浮液，芽孢纯度达到99％以上。

8.根据权利要求1-7任一项所述的方法，其特征在于，所用微生物包括枯草芽孢杆菌、嗜热脂肪地芽孢杆菌以及其他产芽孢的细菌。