[发明专利]一种金属离子标记的免疫反应单脉冲检测方法

说明书

本发明公开了一种金属离子标记的免疫反应单脉冲检测方法，通过采用电感耦合等离子体或微波等离子体质谱分析技术实现了单脉冲信号检测，通过采用金属纳米颗粒标记免疫反应，进一步利用电感耦合等离子体或微波等离子体质谱分析技术检测标记免疫反应的金属离子的脉冲信号，从而实现间接检测待测物的目的。

技术领域

本发明属于医学检验领域，但不限制于此领域，具体涉及一种金属离子标记的免疫反应单脉冲检测方法。

背景技术

目前，在免疫诊断方面，临床上常用的有放射免疫法、酶联免疫法、化学发光法、电化学发光法；同时在快速检验领域，常用的有胶体金法、荧光免疫层析法以及新兴的微流控芯片检测方式等。然而，放射免疫法存在放射污染，对人体损害大；酶联免疫法和化学发光法的操作繁琐、检测周期长；电化学法检测系统配套使用的电极设备以及精密的信号解析系统，检测设备昂贵；胶体金法、荧光免疫层析法批间变异大、标记物的稳定性差；微流控芯片法目前尚未实现商业化应用。

质谱分析是一种测量离子质荷比(质量-电荷比)的分析方法，其基本原理是使试样中各组分在离子源中发生电离，生成不同荷质比的带电荷的离子，经加速电场的作用，形成离子束，进入质量分析器。在质量分析器中，再利用电场和磁场使发生相反的速度色散，将它们分别聚焦而得到质谱图，从而确定其质量。

电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)是20世纪80年代发展起来的无机元素和同位素分析测试技术，它以独特的接口技术将电感耦合等离子体的高温电离特性与质谱计的灵敏快速扫描的优点相结合而形成一种高灵敏度的分析技术。ICP-MS仪器所使用的等离子体除了方位和线圈接地方式外，与发射光谱中使用的基本相同。所使用的质量分析器、离子检测器和数据采集系统又与四极杆GC-MS仪器相类似。质量分析器多采用四极杆质谱计，也有采用具有高分辨的双聚焦扇形磁场质谱计、飞行时间质谱计等。该技术的特点：灵敏度高；速度快，可在几分钟内完成几十个元素的定量测定；谱线简单，干扰相对于光谱技术要少；线性范围可达7～9个数量级；样品的制备和引入相对于其他质谱技术简单；既可用于元素分析，还可进行同位素组成的快速测定；测定精密度(RSD)可到0.1％。

微波等离子体炬是金钦汉等提出并研制的一种新型等离子体发生装置。微波等离子体炬质谱(MPT-MS)包括微波功率源、雾化去溶装置、微波等离子炬和离子质量分析装置。样品溶液由蠕动泵泵入雾化去溶装置进行雾化去溶，产生的干燥气溶胶由矩管的中心通道进入炬焰，在微波功率源的作用下电离，产生可供质谱仪分析的离子。其具有功率低、耗气省、易于医学检测推广应用的特点。

ICP-MS与MPT-MS质谱分析技术具有动态线性范围宽、检测限低、灵敏度高、测量精度高的优点，被广泛应用于生物、医药、环境、食品等领域。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的是提供一种金属离子标记的免疫反应单脉冲检测方法。

为了实现本发明的目的，本发明提供一种金属离子标记的免疫反应单脉冲检测方法，包括以下步骤：

1)将含有待测物的样本、具有特异亲和性一对物质中的一个标记的待测物完全抗原、小纳米颗粒标记的待测物的一株抗体加入到反应池中，孵育1-120min，形成小纳米颗粒标记的第一免疫复合物和一端标记小纳米颗粒，另一端标记具有特异亲和性的一对物质中的一个的第二免疫复合物；

2)然后向步骤1)反应后的混合物中加入具有特异亲和性的一对物质中的另一个标记的大纳米微球，标记在第二免疫复合物一端的具有特异亲和性一对物质中的一个与标记在大纳米微球表面的具有特异亲和性一对物质中的另一个进行特异性结合，形成大纳米微球外表面结合了大量的第二免疫复合物；