[发明专利]一种适用于卤虫无节幼体的噬菌体强化方法

权利要求书

1.一株能够裂解维氏气单胞菌的噬菌体，其特征在于：噬菌体名称为ΦA8-29，分类名称为Aeromonas veronii phage，保藏编号：CGMCC No.9152；保藏单位：中国普通微生物菌种保藏管理中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期：2014年04月25日。

2.权利要求1所述的噬菌体裂解的宿主菌，名称为A8-29，分类名称为Aeromonasveronii，保藏编号：CGMCC No.9093，保藏单位：中国普通微生物菌种保藏管理中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期：2014年04月25日。

3.一株能够裂解潘氏变形杆菌的噬菌体，其特征在于：噬菌体名称为ΦP4-3，分类名称为：Proteus pennea phage。

4.权利要求3所述的噬菌体裂解的宿主菌，名称为：P4-3，分类名称为Proteus pennea。

5.一株能够裂解类志贺邻单胞菌的噬菌体，其特征在于：噬菌体名称为ΦP4-7，分类名称为：Plesiomonas shigelloides phage。

6.权利要求5所述的噬菌体裂解的宿主菌，名称为：P4-7，分类名称为Plesiomonasshigelloides。

7.一种适用于卤虫无节幼体的噬菌体强化方法，步骤如下：

(1)噬菌体裂解液的制备：

宿主菌培养至对数期中期(OD₆₀₀＝0.6)，加入适量噬菌体裂解液，使感染复数(multiplicity of infection，MOI)约等于1，振荡培养4～6h，4000×g离心10min，上清液即为噬菌体裂解液。

(2)卤虫的孵化：

将2g卤虫卵(Artemia salina)加入到1L终浓度为2.8％(ω/v)的氯化钠溶液中，pH7.8，在水温28℃的条件下，通气24～36h即可得到卤虫无节幼体。

(3)滴度对噬菌体强化的影响：

在密度为100只/mL的卤虫无节幼体悬液中添加不同滴度的噬菌体，吸附40min后，收集并匀浆无节幼体，梯度稀释后稀释液与指示菌混合倒双层平板，每个滴度三个平行。

(4)时间对噬菌体强化的影响：

在盐度为20‰的盐水中，将刚孵化的密度为100只/mL的卤虫无节幼体与终浓度为10⁷pfu/mL的噬菌体混合。每5min取一次样，收集并匀浆无节幼体，梯度稀释后稀释液与指示菌混合倒双层平板，每个滴度三个平行。