[发明专利]一种凝结芽孢杆菌和酿酒酵母混菌固态发酵的方法

说明书

一种凝结芽孢杆菌和酿酒酵母混菌固态发酵的方法，挑取凝结芽孢杆菌斜面种子和凝结芽孢杆菌斜面种子分别于种子液体培养基中进行培养，灭菌后的固体发酵培养基，按固体发酵培养基重量的5%‑10%接种凝结芽孢杆菌种子液，按固体发酵培养基重量的3%‑5%接种酿酒酵母种子液，将接菌后的物料置于不透气材料制成的锥形瓶状的半封闭装置中，培养温度35‑37℃，培养时间44‑48h；发酵结束，55℃烘干，粉碎，过筛，得到含凝结芽孢杆菌和酿酒酵母的复合菌剂。优点是：在混菌固态发酵中，两株菌互利共生，混合发酵的菌数、酶活力、产酸及底物利用率方面显著高于单株菌的固态发酵，具有设备投资少、节能、工艺简化、操作简便的优点。

技术领域

本发明属于微生物发酵技术领域，涉及一种凝结芽孢杆菌和酿酒酵母混菌固态发酵的方法。

背景技术

酿酒酵母（saccharomyces cerevisiae）是我国农业部2003年318号公告中允许使用的微生物菌种之一，是一类单细胞真核微生物，以活菌形式通过消化道发挥作用，可显著提高动物肠道的淀粉酶、脂肪酶和胃蛋白酶的活，从而提高动物的消化能力，提高饲料报酬，具有较强的免疫调节功能、降低胆固醇以及抗氧化作用，酵母菌可以耐受一定剂量的抗生素，能逐渐帮助动物从抗生素到无抗生素的饲料过渡。

凝结芽孢杆菌（bacillus coagulans），我国农业部2013年12月公布的新版《饲料添加剂品种目录（2013）》将其正式列入，使用于猪、鸡、水产动物，除了具有耐高酸、耐高热、耐高渗透压、易保存等芽孢杆菌属的特点，还产生乳酸，具有乳酸菌和芽孢杆菌的双重优良特性，耐储存、不易失活，可促进动物生长，改善动物产品质量，在调节肠道菌群平衡、刺激免疫等方面效果显著，是替代抗生素的优势菌种之一。

目前，已有报道凝结芽孢杆菌的混菌固态发酵方法，混合的菌种以植物乳杆菌、干酪乳杆菌和枯草芽孢杆菌为主，且多数为多菌种分步发酵。凝结芽孢杆菌和酿酒酵母混菌固态发酵方法却少有报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种凝结芽孢杆菌和酿酒酵母混菌固态发酵的方法，在混菌固态发酵中，两株菌互利共生，混合发酵的菌数、酶活力、产酸及底物利用率方面显著高于单株菌的固态发酵，具有设备投资少、节能、工艺简化、操作简便的优点。

本发明的技术解决方案是：

一种凝结芽孢杆菌和酿酒酵母混菌固态发酵的方法，其具体步骤是：

（1）凝结芽孢杆菌菌种的培养

挑取凝结芽孢杆菌斜面种子一环于种子液体培养基中进行培养，培养温度35℃-40℃，转速160-200rpm，培养时间18-24h；

（2）酿酒酵母的培养

挑取凝结芽孢杆菌斜面种子一环于种子液体培养基中进行培养，培养温度30℃-35℃，转速160 rpm -200rpm，培养时间16h-24h；

（3）制作固体发酵培养基

固态发酵培养基重量比例组成为：玉米面：麸皮：豆饼粉：稻壳=10:(6-10): (2-4):(3-4)，水分控制在40%-65%，pH 6.8-7.2；

（4）固体发酵培养

灭菌后的固体发酵培养基，按固体发酵培养基重量的5%-10%接种凝结芽孢杆菌种子液，按固体发酵培养基重量的3%-5%接种酿酒酵母种子液，将接菌后的物料置于不透气材料制成的锥形瓶状的半封闭装置中，培养温度35-37℃，培养时间44-48h。发酵结束，55℃烘干，粉碎，过筛，得到含凝结芽孢杆菌和酿酒酵母的复合菌剂。

进一步的，所述凝结芽孢杆菌和酿酒酵母的种子的培养基，g/L：葡萄糖20-50，蛋白胨10-50，酵母膏10-50,pH 6.8-7.2。