[发明专利]一种斜带石斑鱼的卵母细胞标记基因slbp2的cDNA及其应用

权利要求书

1.一种斜带石斑鱼的卵母细胞标记基因slbp2的cDNA，其特征是：它的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

2.权利要求1所述斜带石斑鱼的卵母细胞标记基因slbp2的编码蛋白，其特征是：它的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

3.权利要求1所述的斜带石斑鱼的卵母细胞标记基因slbp2的cDNA的制备方法，其特征是包括以下步骤：

（1）提取斜带石斑鱼性腺总RNA；

（2）将提取的总RNA用SMART^TM PCR cDNA 合成试剂盒逆转录出用于RACE的模板；

（3）设计两对特异的上下游引物，通过RACE扩增，获得斜带石斑鱼的卵母细胞标记基因slbp2的cDNA；

步骤（3）中所述的两对特异性的上下游引物，其中一对特异性的上下游引物的核苷酸序列分别如SEQ ID NO：3~SEQ ID NO：4所示，另一对特异性的上下游引物的核苷酸序列分别如SEQ ID NO：5~SEQ ID NO：6。

4.一种斜带石斑鱼的卵母细胞标记基因slbp2的特异性探针，其特征是：它的核苷酸序列如SEQ ID NO：7所示。

5.权利要求4所述的斜带石斑鱼的卵母细胞标记基因slbp2的特异性探针的制备方法，其特征是包括以下步骤：

（1）提取斜带石斑鱼性腺总RNA；

（2）将提取的总RNA用SMART^TM PCR cDNA 合成试剂盒逆转录出用于RACE的模板；

（3）设计两对特异的上下游引物，通过RACE扩增，获得斜带石斑鱼的卵母细胞标记基因slbp2的cDNA；

（4）选取slbp2的cDNA中比较保守的片段，设计上下游引物，进行PCR扩增，所得产物进行电泳，回收目的产物，将目的片段进行重组质粒构建，筛选阳性克隆，提取质粒，用内切酶切割质粒获取目的片段后胶回收，胶回收的片段用DIG探针试剂盒制备获得斜带石斑鱼的卵母细胞标记基因slbp2的特异性探针；

步骤（4）中所述上下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：8~SEQ ID NO：9所示。

6.权利要求4所述的斜带石斑鱼的卵母细胞标记基因slbp2的特异性探针在斜带石斑鱼特异性标记卵母细胞以及鉴定斜带石斑鱼卵母细胞类型中的应用。