[发明专利]一种斜带石斑鱼的卵母细胞标记基因slbp2的cDNA及其应用

说明书

本发明公开了一种斜带石斑鱼的卵母细胞标记基因slbp2的cDNA，它的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。以及该斜带石斑鱼的卵母细胞标记基因slbp2的cDNA的制备方法，本发明还公开了上述斜带石斑鱼的卵母细胞标记基因slbp2的编码蛋白，它的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。本发明还进一步公开了一种斜带石斑鱼的卵母细胞标记基因slbp2的特异性探针及其制备方法，以及该斜带石斑鱼的卵母细胞标记基因slbp2的特异性探针在特异性标记卵母细胞以及鉴定卵母细胞类型中的应用。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种斜带石斑鱼的卵母细胞标记基因slbp2的cDNA及其应用。

背景技术

真核生物中只有小部分mRNA经过磷酸化，且带有poly(A)尾巴；而大部分的mRNA属于复制依赖性mRNA，不经过磷酸化，没有poly(A)尾巴，但是这类mRNA的3′端非编码区包含一个高度保守的茎环结构。该结构与一种特异结合在RNA上的蛋白质相互作用，这种蛋白质被称为茎环结合蛋白(SLBP或HBP)。前人的研究表明，茎环结合蛋白参与mRNA前体的合成、胚胎发育、细胞增殖等多种重要过程。SLBP一般有两种亚型，目前研究比较多的是2型，即SLBP2，编码SLBP2的基因就是slbp2。

石斑鱼属鲈形目(Perciformes)、鮨科(Serranidae)、石斑鱼亚科(Epinephelinae)，石斑鱼属(Epinephelus)。石斑鱼肉质鲜美，营养丰富，经济价值高，是我国南方沿海主要的海水经济养殖鱼类。石斑鱼是雌雄同体鱼类，其个体发育过程中先雌后雄，存在性逆转现象。这一现象导致在人工繁殖过程中经常会出现雄鱼数量不足的问题，严重制约了石斑鱼人工繁殖技术的规模化生产和增养殖事业的发展。因此，探索石斑鱼性逆转的具体机制是很有必要的，信号特异、明显、可信的性别标记基因是研究过程中一项十分有效的工具，石斑鱼标记基因的开发对后续的实验研究十分重要。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种斜带石斑鱼的卵母细胞标记基因slbp2的cDNA及其制备方法和编码蛋白。

本发明的目的还在于提供一种斜带石斑鱼的卵母细胞标记基因slbp2的特异性探针及其制备方法和应用。

本发明的上述第一个目的是通过以下技术方案来实现的：一种斜带石斑鱼的卵母细胞标记基因slbp2的cDNA，它的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

上述斜带石斑鱼的卵母细胞标记基因slbp2的编码蛋白，它的氨基酸序列如SEQID NO：2所示。

上述斜带石斑鱼的卵母细胞标记基因slbp2的cDNA的制备方法，包括以下步骤：

(1)提取斜带石斑鱼性腺总RNA；

(2)将提取的总RNA用SMART^TM PCR cDNA合成试剂盒逆转录出用于RACE的模板；

(3)设计两对特异的上下游引物，通过RACE扩增，获得斜带石斑鱼的卵母细胞标记基因slbp2的cDNA。

步骤(3)中所述的两对特异性的上下游引物，其中一对特异性的上下游引物的核苷酸序列分别如SEQ ID NO：3～SEQ ID NO：4所示，另一对特异性的上下游引物的核苷酸序列分别如SEQ ID NO：5～SEQ ID NO：6。

本发明的上述第二个目的是通过以下技术方案来实现的：一种斜带石斑鱼的卵母细胞标记基因slbp2的特异性探针，它的核苷酸序列如SEQ ID NO：7所示。

上述斜带石斑鱼的卵母细胞标记基因slbp2的特异性探针的制备方法，包括以下步骤：

(1)提取斜带石斑鱼性腺总RNA；

(2)将提取的总RNA用SMART^TM PCR cDNA合成试剂盒逆转录出用于RACE的模板；