[发明专利]酪酸梭菌的富集培养基、富集方法、冷冻干燥保护剂及其冻干粉的制备方法

说明书

本发明公开了一种酪酸梭菌的富集培养基、富集方法、冷冻干燥保护剂及其冻干粉的制备方法；酪酸梭菌的富集培养基，培养基的组成成分有：脱纤维绵羊血，葡萄糖，胰蛋白胨，酵母粉，牛肉浸膏，无水乙酸钠，K₂HPO₄，CaCO₃，MgSO₄·7H₂O，半胱胺酸盐，吐温‑80。本发明还提供一种酪酸梭菌的真空冷冻干燥保护剂，组成成分为：谷氨酸钠、丙酮酸钠、低聚果糖、低聚半乳糖、三聚磷酸钠、脱脂乳粉、蛋白胨、甘油和无菌水。‑196℃液氮冷激方式，促进冷激蛋白的产生提高酪酸梭菌在冷藏条件下的存活率，并真空冷冻干燥过程中缓慢提高冻干温度，本发明提供了一种能够长时间储存、方便广泛应用的酪酸梭菌冻干粉制作技术。

技术领域

本发明涉及一种酪酸梭菌的富集培养基、富集方法、冷冻干燥保护剂及其冻干粉的制备方法，属于肠道有益菌的增殖及真空冷冻干燥保存技术领域。

背景技术

酪酸梭菌又称为酪酸梭状芽孢杆菌、酪酸杆菌、酪酸菌、丁酸梭状芽孢杆菌、丁酸梭菌、丁酸杆菌、丁酸菌，是一种专性厌氧的革兰阳性芽孢杆菌。酪酸梭菌能够促进肠道中乳杆菌及双歧杆菌的生长，抑制肠出血性大肠埃希菌、痢疾志贺菌、霍乱沙门菌、霍乱弧菌等肠道致病菌的生长繁殖，对加强肠道黏膜营养代谢、保护受损的黏膜屏障、激活免疫细胞、改善并恢复肠道正常免疫力、防治肿瘤的生长等有重要作用。

近年来，肠道微生物菌群对人体及动物健康的重要性引起国内外广泛关注，酪酸梭菌是被普遍关注认可的肠道益生菌。目前，酪酸梭菌与双歧杆菌、粪链球菌等益生菌已被多家制药公司研发为微生态制剂，对治疗肠道菌群紊乱引起的肠炎、腹泻、消化不良、肠易激综合征、结直肠癌新生儿黄疸等疾患有显著疗效。同时，酪酸梭菌克服了双歧杆菌、乳酸杆菌等微生物制剂制粒过程中生物活性降低、胃酸通过率低等缺陷，逐渐作为微生态饲用添加剂，用于降低幼畜禽死亡率、促进动物生长、提高机体免疫力等。

鉴于酪酸梭菌优良的生理功能，获得高密度、高稳定性的酪酸梭菌是其发挥效能的关键。目前，对酪酸梭菌的研究主要集中于其微生态制剂的效果及作用机理，对酪酸梭菌的富集、保藏技术研究较少。酪酸梭菌作为一种重要的益生菌，将广泛应用于医药、保健食品、动物饲料和植物肥料等行业，如何能富集获得高密度、高稳定性的酪酸梭菌，这对产品储存、运输、应用等都具有重要意义。

为了获得高密度的酪酸梭菌，其培养基的成分及培养方式是十分重要的，本发明提供一种促进酪酸梭菌增殖的培养基，添加脱纤维绵羊血、各种碳源、氮源、矿物元素为酪酸梭菌的增殖提供丰富营养物质，达到酪酸梭菌富集的目的。

同时在将酪酸梭菌制成冻干粉的过程中会由于冷冻干燥造成部分酪酸梭菌的死亡，因此可以在冻干过程中选择合适的保护剂，本发明将增殖的酪酸梭菌与含有保护剂的营养乳粉充分混合均匀，使保护剂更好的与菌体结合，达到保护酪酸梭菌的目的。研究表明经过冷激后，微生物会在冷激条件下产生冷激蛋白，这是微生物在恶劣条件下的应激反应，因此本发明将酪酸梭菌在真空冷冻干燥前进行低温冷激，促进冷激保护蛋白的产生，并通过缓慢提高真空冷冻干燥温度的方式提高酪酸梭菌在真空冷冻干燥过程中的存活率，提供了一种能够长时间储存、方便广泛应用的高密度酪酸梭菌冻干粉技术。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：提供一种酪酸梭菌的增殖培养基达到富集酪酸梭菌的目的，同时提供一种高密度、高稳定性的酪酸梭菌冻干粉。

本发明的基本原理是将富集的酪酸梭菌与特定的营养乳粉溶液均匀混合，增加酪酸梭菌与保护剂的充分结合，增经过冷激的方式促进冷激保护蛋白的产生提高酪酸梭菌在真空冷冻干燥过程中的存活率，得到高密度、高稳定性的酪酸梭菌冻干粉。

本发明提供了一种酪酸梭菌的富集培养基，培养基的组成成分有：脱纤维绵羊血，葡萄糖，胰蛋白胨，酵母粉，牛肉浸膏，无水乙酸钠，K₂HPO₄，CaCO₃，MgSO₄·7H₂O，半胱胺酸盐，吐温-80。