[发明专利]一种Trop-2特异性嵌合抗原受体细胞制备及其用途

说明书

本发明公开了一种Trop2特异性嵌合抗原受体，其包括信号肽、抗原结合区、铰链区、跨膜区、共剌激信号传导区、CD3ζ信号传导区和T2A短肽，其中信号肽为CSF2RA信号肽、抗原结合区为scFv序列，铰链区为CD8α区，跨膜区为CD28跨膜区的，共刺激信号转导区为CD28和4‑1BB，CD3ζ信号转导区为CD3分子胞内信号转导区；上述嵌合抗原受体具体为RZ‑28bbZ，其核苷酸编码序列如SEQ ID No.1所示；本发明还提供一种包含上述核苷酸重组表达载体及其宿主细胞、构建方法、在哺乳动物细胞肿瘤治疗中的应用，本发明所述的Trop2特异性嵌合抗原受体可以通过修饰T细胞，使得CAR‑T细胞高效特异地治疗卵巢癌。

技术领域

本发明涉及免疫细胞制备领域，具体地，本发明涉及一种Trop2特异性嵌合抗原受体及其用途。

技术背景

卵巢癌早期缺乏典型的临床表现，因此常常进展至晚期阶段才被发现，其五年生存率不到30％，是女性生殖系统肿瘤最常见的死因，严重威胁着女性的生命安全。目前，卵巢癌治疗主要采取手术治疗辅以化疗的联合疗法，但是超过70％的卵巢癌患者于初次治疗后复发，并易对化疗产生耐受或抵抗作用，因此，迫切需要探寻新的卵巢癌临床治疗方法。

嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T cell immullomerapy,CAR-T)技术是基于抗体靶向技术的免疫治疗新方法，在血液系统恶性肿瘤治疗领域取得的突破性进展初步证实了其治愈肿瘤的潜力，使其成为近年来肿瘤免疫治疗领域的热点。受到CAR-T技术在血液系统恶性肿瘤治疗领域成功应用的鼓舞，CAR-T技术在实体瘤治疗领域的研究也相继展开，涉及间皮瘤、神经母细胞瘤、肝癌、胰腺癌、结肠癌等多种肿瘤类型，其中CAR-T技术在治疗脑胶质瘤、神经母细胞瘤的研究中取得了显著的治疗效果。

CAR的结构分为主要有胞外抗原结合区(单链抗体可变区，single chain Fragmentvariation,scFv)、跨膜区和胞内信号区(共刺激信号和CD3ζ信号)，第一代CAR结构不含有共刺激信号，第二代CAR结构含有一个共刺激信号(如CD28或4-1BB)，第三代CAR结构还有串联的两个共刺激信号，第四代CAR分子中包含了如IL2等能改善肿瘤微环境的因子。CD28共刺激信号能更高细胞的增殖效率，4-1BB共刺激信号能够更好的维持CAR-T细胞的存活时长。CAR-T通过CD19靶点在血液肿瘤中取得突破性进展，部分研究有效率达90％以上，然而CAR-T在实体瘤上还没有取得突破，所以迫切需要新的肿瘤靶点，新的CAR分子设计以促进实体瘤领域的进展。

CAR-T技术依赖抗体与抗原的特异性结合，使T细胞精准靶向表达目标抗原的肿瘤细胞，因此，合适的靶抗原是CAR-T技术应用的关键。理想的靶抗原应该具备在肿瘤组织中高表达而在正常组织中不表达或低表达的特点。人滋养层细胞表面抗原2(humantrophoblast cell surface antigen 2,Trop-2)是一种由人TACSTD2基因编码的I型跨膜糖蛋白。研究表明，Trop2是一种肿瘤相关蛋白，与肿瘤细胞的侵袭、转移及疾病的预后密切相关。Trop2在卵巢癌、胃癌、结肠癌、前列腺、胰腺癌等多种肿瘤细胞中过表达，而在人正常组织中不表达或低表达，在肿瘤的靶向治疗中具有潜在的应用价值。因此，本研究选取Trop2作为靶点，制备靶向Trop2的CAR-T细胞并检测其对Trop2表达阳性的卵巢癌细胞的杀伤作用，为卵巢癌的治疗提供新的方法。

发明内容

本发明要解决的技术问题是，提供一种新的通过靶向Trop2的CAR分子，并证明其在实体瘤治疗中的潜在应用。具体的说，本发明提供一种Trop2特异性嵌合抗原受体(CAR)，这种CAR分子通过靶向肿瘤细胞表面的Trop2蛋白并激活T细胞下游的信号通路，赋予T细胞杀伤带有Trop2靶点肿瘤细胞的能力。

为解决上述技术问题，本发明采取的技术方案是：