[发明专利]一种葡萄保鲜剂及其使用方法

说明书

本发明公开了一种葡萄保鲜剂，所述葡萄保鲜剂包括枯草芽孢杆菌(CGMCC编号：1.8801)发酵水解液和水溶性壳聚糖。本发明还公开了一种葡萄保鲜剂的使用方法。使用本发明的保鲜剂的葡萄表面微生物数量比未使用保鲜剂的葡萄成指数倍降低，果粒硬度高，葡萄梗的颜色更为鲜绿，在葡萄贮藏期间，葡萄营养物质流失率小，外观新鲜度和口感得到很好的保持，整体葡萄的保鲜期要延长7～10天。本发明的葡萄保鲜剂具有高效、安全和环保等特点，有广阔的应用前景。

技术领域

本发明涉及食品生物技术领域，具体涉及一种葡萄保鲜剂及其使用方法。

背景技术

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)是一类好氧内生芽孢的革兰氏阳性细菌，是对人畜无毒无害的益生菌，该菌不仅对人与动物无毒害作用，且对环境友好，具有显著的抗菌活性和抗逆性，已应用于农业。枯草芽孢杆菌生长快、营养简单，能产生耐热、抗逆的芽孢，其芽孢具有抗逆性强、利于保藏的特点，又能忍受极端的外部环境而长期存活，国内外学者在枯草芽孢杆菌防治植物病害方面进行了大量研究，一些枯草芽孢可对于采收前大田玉米，小麦，辣椒，黄瓜等，表现出明显的防治病害的作用。目前对枯草芽孢杆菌用于大田作物防霉的专利申请有：CN105505836A、CN106544304A等。可是对于果蔬采后保鲜的研究及应用，鲜见报道。

葡萄营养丰富，外观与风味俱佳，是我国的六大水果之一，葡萄含糖量高、水分多、果皮薄、果肉柔软而极易受机械损伤和病原菌的侵染，造成葡萄采后或贮藏期间落粒、萎蔫和腐烂，严重影响葡萄的营养品质和感官品质；而目前葡萄主要采用熏硫保鲜，可能会严重影响葡萄的安全品质。

随着科技的发展，人们生活水平的提高，人们对于不同地区不同季节生产的水果的需求量逐渐加大，而葡萄不耐贮藏，这使得人们对葡萄的保鲜贮存和运输提出了越来越高的要求，有关研究人员在冰温保鲜、气调贮藏、臭氧、短时高浓度CO₂处理、涂膜保鲜、高压静电场处理、缓释/控释保鲜剂等非硫或降硫保鲜措施方面进行深入研究，并取得了一定的进展。但迄今为止，葡萄保鲜的最有效和主要的手段仍然是硫制保鲜剂处理，可有效地控制灰霉病菌的生长。但过量SO₂会对果实漂白伤害，以及引发环境的污染，甚至会对人类健康造成危害，这就对葡萄贮藏保鲜提出了更高的食用安全要求，研究更安全、高效的葡萄保鲜技术尤为重要。

发明内容

为了解决现有技术存在的问题，本发明的目的在于提供一种采用蛋白酶对枯草芽孢杆菌发酵液进行水解所得到的水解液，与水溶性壳聚糖复配制成的葡萄保鲜剂，该葡萄保鲜剂安全且高效，解决葡萄保鲜中存在化学残留及对环境污染等一些问题，同时具有良好的保鲜效果，可显著延长葡萄的保鲜期。

为实现上述目的，本发明的第一方面提供了一种葡萄保鲜剂，所述葡萄保鲜剂包括枯草芽孢杆菌(CGMCC编号：1.8801)发酵水解液和水溶性壳聚糖。

进一步地，所述枯草芽孢杆菌(CGMCC编号：1.8801)发酵水解液的重量百分含量为85～95％。

进一步地，所述枯草芽孢杆菌发酵水解液的制备方法包括如下步骤：

1)菌种种子液制备：将枯草芽孢杆菌在NA平板培养基上活化，取单菌落划线于NA培养基上，封胶倒置于33℃培养箱培养24h，得到活化的菌株，用移菌环将活化的菌株转移至LB培养基中，在33～50℃，180～300r/min的条件下，培养24～50h，制得的菌种种子液于-1～4℃保存备用；

2)发酵液的制备：将步骤1)备好的菌种种子液，以3～6％(V/V)的接种量接种于NB培养基的三角瓶中，在33～50℃、180～300r/min条件下，培养24～48h，获得菌悬液，将菌悬液经10000r/min离心后取上清液，用微孔滤膜过滤除菌，得到发酵液于4℃保存备用；

3)发酵水解液的制备：用蛋白酶在50～60℃、pH为7.5～9.2、以酶量为2.5～5.0％的条件下水解步骤2)制得的发酵液10～20h，得到发酵水解液。