[发明专利]一种高通量筛选分离苏云金芽胞杆菌的方法和应用有效
| 申请号： | 201810402728.5 | 申请日： | 2018-04-28 |
| 公开（公告）号： | CN108611296B | 公开（公告）日： | 2020-08-11 |
| 发明（设计）人： | 王奋山;姚英娟;刘子荣;徐雪亮;刘小娟;曾绍民 | 申请（专利权）人： | 江西省农业科学院农业应用微生物研究所(江西省农村能源研究中心) |
| 主分类号： | C12N1/20 | 分类号： | C12N1/20;C12N1/02;C12R1/07 |
| 代理公司： | 武汉宇晨专利事务所 42001 | 代理人： | 龚莹莹 |
| 地址： | 330200 江西*** | 国省代码： | 江西;36 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 通量 筛选 分离 苏云金芽胞 杆菌 方法 应用 | ||
1.一种高通量筛选分离苏云金芽胞杆菌的方法，包括如下步骤：
步骤一，选择性芽胞化培养：将样品悬液涂布在选择性芽胞化培养基的平板上，28-30℃培养3-5天，使其中的Bt细胞选择性扩繁并最终芽胞化；
步骤二，选择性萌发抑制培养和高温处理：将所述平板上的培养物收集并制备成芽胞悬液，接种到选择性萌发抑制培养基中，28-30℃摇床培养4-8小时，使大部分杂菌萌发生长，然后通过65-80℃处理30-60分钟；
步骤三，选择性富集培养：将上述高温处理后的培养物涂布在选择性富集培养基的平板上，28-30℃培养12-18h，使其长出肉眼可见的单菌落，随机挑取至少12个单菌落，转接到新的选择性富集培养基的平板上，28-30℃培养3-5天至芽胞期；
步骤四，镜检筛选和分离：将所述芽胞化的菌落进行制片镜检，筛选出含有伴胞晶体的菌落，即为分离的Bt菌株；
所述的选择性芽胞化培养基，包括：碳酸钙0.05-0.2g/L，氯化锰0.02-0.08mM，pH6.8的磷酸钠缓冲液0.03-0.1M，琼脂粉15-20g/L，pH值6.0-7.5；
所述的选择性萌发抑制培养基，包括：氯化钠7.5-15g/L，胰蛋白胨7.5-15g/L，酵母浸粉3.5-7.5g/L，乙酸钠15-35g/L，乙酸钾3.0-7.5g/L，丙三醇2-8ml/L，pH值6.0-7.5；
所述的选择性富集培养基，包括：胰蛋白胨3.5-7.5g/L，酵母浸粉1.0-2.0g/L，碳酸钙0.05-0.2g/L，氯化锰0.02-0.08mM，pH6.8的磷酸钠缓冲液0.03-0.1M，葡萄糖3.0-7.5g/L，琼脂粉15-20g/L，pH值6.0-7.5。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：
所述的选择性芽胞化培养基，包括：碳酸钙0.1g/L，氯化锰0.04mM，磷酸钠缓冲液0.05M，琼脂粉18g/L，pH值6.8；
所述的选择性萌发抑制培养基，包括：氯化钠10g/L，胰蛋白胨10g/L，酵母浸粉5g/L，乙酸钠24.61g/L，乙酸钾4.91g/L，丙三醇4ml/L，pH值6.8；
所述的选择性富集培养基，包括：胰蛋白胨5g/L，酵母浸粉1.5g/L，碳酸钙0.1g/L，氯化锰0.04mM，磷酸钠缓冲液0.05M，葡萄糖5g/L，琼脂粉18g/L，pH值6.8。
3.权利要求1所述的方法在筛选或分离苏云金芽胞杆菌中的应用。
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