[发明专利]抗破伤风毒素中和抗体、其制备方法及用途

说明书

本发明提供了一种抗破伤风毒素中和抗体、其制备方法和用途，所述抗体的轻链可变区的CDR的氨基酸序列如SEQ ID NO.1‑3所示；所述中和抗体的重链可变区的CDR的氨基酸序列如SEQ ID NO.4‑6所示。本发明的中和抗体无免疫原性、特异性好、亲和力高、成分清晰、无病原体污染等潜在风险，广泛适用于各种人群，所述制备方法简单高效、适于标准化生产。

技术领域

本发明属于细胞免疫学领域，涉及一种全人源抗破伤风毒素中和抗体；另外，本发明还涉及该中和抗体的制备方法和用途。

背景技术

破伤风(Tetanus)是由于感染破伤风梭状芽孢杆菌(clostridiumtetani)而引起的急性、致死性的人畜共患神经系统疾病。破伤风梭状芽孢杆菌广泛存在于人、畜的肠道和土壤中，人群携带率高达25％，不同类型和大小的伤口均可成为破伤风梭状芽孢杆菌入侵的门户。当人被感染后，潜伏期内破伤风梭状芽孢杆菌在厌氧条件下于创口处大量繁殖并释放毒素，破伤风毒素通过破坏人体神经细胞而侵害中枢神经系统，导致机体痉挛、四肢强直、角弓反张等症状，最终使人因窒息或呼吸衰竭而死亡。在战争爆发和自然灾害频发时期，破伤风成为一项严峻的公共卫生问题，任何年龄人群均可能发生破伤风感染，死亡率为20-30％，重症患者以及新生儿的死亡率高达80％。

破伤风毒素作用迅速，毒性很强。当患者被确诊为感染破伤风杆菌后，体内一般已存在大量细菌和毒素，使用抗菌素已不能挽救患者生命。预防和治疗破伤风的唯一有效的方法是及时注射抗破伤风毒素抗体中和毒素，并通过抗体受体的介导将毒素从体内清除。近年来出现越来越多关于人-鼠嵌合、人源和全人源抗破伤风毒素单克隆抗体的报道。利用B细胞筛选抗体工程技术对全人源单克隆抗体进行改造制备的基因工程抗体不仅消除了血清蛋白引起的过敏反应，而且克服了人源免疫球蛋白生产过程的弊端，具有较好的发展前景。采用基因重组技术，在基因水平上对抗体分子进行改造，形成嵌合抗体，即将鼠抗可变区基因与人IgG恒定区链接；人源化抗体，即将鼠抗可变区的互补决定区移植入人IgG的骨架区中，进一步降低了鼠抗引起的免疫反应；完全人源抗体，该类抗体不含任何外来基因，不会造成过敏反应，是目前基因工程抗体研究的热点之一。然而这些报道的抗体虽然能够与破伤风毒素结合，但中和毒素的效价不高，且抗体的产业化生产问题尚未解决。

因此，本领域迫切需要利用更先进的技术，开发高效安全的全人源抗破伤风毒素中和抗体，用于取代市场供应的血清制品，以满足人类的需求。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的之一在于提供适一种全人源抗破伤风毒素单克隆中和抗体，及其制备方法和用途，所述抗体无免疫原性、特异性好、亲和力高、成分清晰、无病原体污染等潜在风险，广泛适用于各种人群，所述制备方法简单高效、适于标准化生产。

为达此目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供了一种抗原结合片段，所述抗原结合片段的轻链可变区的互补决定区CDR的氨基酸序列如SEQ ID NO.1-3所示；

所述抗原结合片段的重链可变区的互补决定区CDR的氨基酸序列如SEQ ID NO.4-6所示。

优选地，所述抗体或其抗原结合片段的轻链可变区的互补决定区CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示或SEQ ID NO.1经取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且形成的抗体或其抗原结合片段具有相同或相似活性得到的氨基酸序列。

优选地，轻链可变区的互补决定区CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列经过不高于20％，优选为不高于5％的氨基酸残基的取代、缺失或添加而获得的同源性氨基酸序列，且获得的氨基酸序列具有结合破伤风毒素的活性。

优选地，轻链可变区的互补决定区CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示或SEQID NO.2经取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且形成的抗体或其抗原结合片段具有相同或相似活性得到的氨基酸序列。