[发明专利]一种提高抗体多聚体比例的细胞培养工艺

权利要求书

1.一种提高抗体多聚体比例的细胞培养方法，其特征在于，包括：

对杂交瘤细胞进行无血清驯化培养，得到无血清细胞；

对所述无血清细胞进行扩大培养，获得扩培无血清细胞；

对所述扩培无血清细胞进行悬浮培养；

加入水解物，收样即得到单克隆抗体；

水解物为水解乳蛋白和大豆蛋白胨混合的水解物；

其中，无血清驯化培养、扩大培养以及悬浮培养所用的无血清培养基均为DMEM和Hybridoma SFM混合的混合培养基。

2.如权利要求1所述提高抗体多聚体比例的细胞培养方法，其特征在于，所述“对细胞进行无血清驯化培养，得到无血清细胞”包括：

将细胞株通过逐步降血清法进行驯化，从而使所述细胞株适应所述无血清培养基。

3.如权利要求2所述提高抗体多聚体比例的细胞培养方法，其特征在于，所述“对所述无血清细胞进行扩大培养，获得扩培无血清细胞”包括：

将所述无血清细胞在所述无血清培养基中接种并扩培，每3天传代一次，获得扩培无血清细胞。

4.如权利要求3所述提高抗体多聚体比例的细胞培养方法，其特征在于，

进行扩大培养所使用的无血清培养基中，DMEM和Hybridoma SFM的混合比例为1:1。

5.如权利要求3所述提高抗体多聚体比例的细胞培养方法，其特征在于，在所述“将所述无血清细胞在所述无血清培养基中接种并扩培，每3天传代一次，获得扩培无血清细胞”中，

所述无血清细胞的接种密度为10万个/mL；

传代后的所述扩培无血清细胞的密度为10万个/mL。

6.如权利要求1所述提高抗体多聚体比例的细胞培养方法，其特征在于，所述“对所述扩培无血清细胞进行悬浮培养”包括：

将所述扩培无血清细胞在离心力为200g的条件下进行离心10分钟，去除上清液，并进行细胞重悬；

细胞重悬后，接种到所述无血清培养基中以进行悬浮培养。

7.如权利要求6所述提高抗体多聚体比例的细胞培养方法，其特征在于，进行悬浮培养所使用的无血清培养基中，DMEM所占的总体积的比例为30％-70％。

8.如权利要求6所述提高抗体多聚体比例的细胞培养方法，其特征在于，在所述“接种到所述无血清培养基中以进行悬浮培养”中，所述悬浮培养的条件为8％CO₂，温度保持37℃；接种密度为300万个/mL；悬浮培养时间为24小时。

9.如权利要求1所述提高抗体多聚体比例的细胞培养方法，其特征在于，所述“加入水解物，收样即得到单克隆抗体”包括：

在进行悬浮培养24小时后，每天补加水解物直至培养96小时，离心、过滤纯化，得到单克隆抗体。