[发明专利]一种提高抗体多聚体比例的细胞培养工艺

说明书

本发明提供了一种提高抗体多聚体比例的细胞培养工艺，获得扩培无血清细胞，并进行悬浮培养；加入水解物，收样即得到单克隆抗体。实现了通过对于细胞培养工艺的调整从而对于抗体多聚体比例进行了提高，本发明所提供的细胞培养工艺路线简单，实验条件要求低，工艺稳定，保证了所制得的抗体多聚体的质量。

技术领域

本发明属于细胞培养技术领域，尤其涉及一种提高抗体多聚体比例的细胞培养工艺。

背景技术

单克隆抗体具有广泛的应用，可用于疾病的诊断和治疗等。目前用于诊断的单克隆抗体主要来源于腹水法或细胞培养方法，所用细胞主要为杂交瘤细胞。

单克隆抗体质量的好坏直接关系到诊断试剂的质量。用于诊断用途的单克隆抗体需要有较高的灵敏度，在实践中我们发现往往提高抗体的多聚体比例可以提高抗体的灵敏度。提高抗体的多聚体比例主要为在抗体纯化后通过调低pH或加热等方式进行，而通过纯化后调低pH或加热等方式进行往往反应条件剧烈，工艺并不稳定，无法保证抗体多聚体的质量且工艺路线复杂。

总之，现有的对于抗体多聚体比例进行提高的细胞培养工艺，工艺路线复杂，反应条件剧烈，工艺不稳定，无法保证抗体多聚体的质量。

发明内容

本发明提供一种提高抗体多聚体比例的细胞培养工艺，以解决现有的细胞培养工艺中的缺陷。

为解决上述问题，本发明提供一种提高抗体多聚体比例的细胞培养工艺，包括：

对细胞进行无血清驯化培养，得到无血清细胞；

对所述无血清细胞进行扩大培养，获得扩培无血清细胞；

对所述扩培无血清细胞进行悬浮培养；

加入水解物，收样即得到单克隆抗体。

优选地，所述“对细胞进行无血清驯化培养，得到无血清细胞”包括：

将细胞株通过逐步降血清法进行驯化，从而使所述细胞株适应无血清培养基。

优选地，所述“对所述无血清细胞进行扩大培养，获得扩培无血清细胞”包括：

将所述无血清细胞在所述无血清培养基中接种并扩培，每3天传代一次，获得扩培无血清细胞。

优选地，所述无血清培养基为DMEM和Hybridoma SFM混合的第一混合培养基；

所述第一混合培养基中DMEM和Hybridoma SFM的混合比例为1:1。

优选地，在所述“将所述无血清细胞在所述无血清培养基中接种并扩培，每3天传代一次，获得扩培无血清细胞”中，

所述无血清细胞的接种密度为10万个/mL；

传代后的所述扩培无血清细胞的密度为10万个/mL。

优选地，所述“对所述扩培无血清细胞进行悬浮培养”包括：

将所述扩培无血清细胞在离心力为200g的条件下进行离心10分钟，去除上清液，并进行细胞重悬；

细胞重悬后，接种到第二混合培养基中以进行悬浮培养。

优选地，所述第二混合培养基为DMEM和Hybridoma SFM混合的培养基；

所述混合培养基中，DMEM所占的总体积的比例为30％-70％。

优选地，在所述“接种到第二混合培养基中以进行悬浮培养”中，所述悬浮培养的条件为8％CO₂，温度保持37℃；接种密度为300万个/mL；悬浮培养时间为24小时。

优选地，所述“加入水解物，收样即得到单克隆抗体”包括：