[发明专利]三种法定基源黄精的鉴别方法

说明书

本发明涉及三种法定基源黄精的鉴别方法。利用超声法提取收集到的药材，提取液经PS/AL固相萃取小柱净化后，采用超高效液相色谱串联静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC‑Orbitrap MS)技术分别对其化学成分进行表征，并用多元统计分析处理数据，包括主成分分析(PCA)、偏最小二乘法判别分析(PLS‑DA)、正交校正的偏最小二乘分析(OPLS‑DA)及聚类分析(HCA)。我们发现三种基源黄精药材的化学成分存在明显差异，所建分析方法可用于区分三种法定基源黄精，研究结果将为黄精药材的深入研究及质量标准的科学制定提供依据。

技术领域

本发明涉及中药鉴定领域，尤其是对于黄精化学成分的鉴定。

背景技术

黄精始载于晋代《名医别录》，具补肾益精、滋阴润燥之功，用于滋补强身和治疗肾虚精亏，肺虚燥咳以及脾胃虚弱之证^[1]，是中医临床常用药物之一。现代药理学研究证明，黄精具有增强免疫、降低血脂、血糖、延缓衰老等多种药理作用^[2]，是重要的药食两用资源，誉有“血气双补之王”之称^[3]。

2015版《中国药典》规定，黄精来源于百合科植物滇黄精Polygonatum kingianumColl.et Hemsl.、黄精Polygonatum sibiricum Red.或多花黄精Polygonatum cyrtonemaHua的干燥根茎。根据形状不同，分别习称“大黄精”、“鸡头黄精”、“姜形黄精”^[1]。3种法定基源黄精在中国分布较广，蕴藏量较大，其中黄精分布于东北、华北、西北、华东以及河南、湖北、四川、贵州；多花黄精分布于华东、中南、四川、贵州等地；滇黄精主产云南，四川、贵州、广西等省区也有分布^[4]。

黄精主要含有多糖、甾体皂苷、三萜皂苷、黄酮、蒽醌、生物碱、木脂素、氨基酸等成分^[5]，其中甾体皂苷、三萜皂苷、黄酮为黄精属植物的特征性成分，甾体皂苷和多糖在黄精中含量较高且通常认为是其主要活性成分。尽管当前已建立了黄精植物这一个品种^[6]的HPLC指纹图谱及浙江产黄精药材酸水解物的HPLC指纹图谱^[7]，且报道了不同产地的黄精植物中薯蓣皂苷元含量差异较大^[6]，然而，药典收载的三种法定基源黄精的化学成分是否存在差异目前仍未见报道。另外，在药材市场上，市售黄精类药材多为片状，难以采用性状鉴别、显微等方法区分、鉴别不同品种药材。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本文采用超高效液相色谱串联四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱技术对收集的不同基源的黄精药材的化学成分进行表征分析，并利用主成分分析(PCA)、偏最小二乘法判别分析(PLS-DA)、正交校正的偏最小二乘分析(OPLS-DA)及聚类分析(HCA)4种多元统计分析方法对数据进行比较分析，首次探讨不同基源黄精化学成分的差异性。

本研究所建立方法可用于区分三种基源的黄精药材，研究结果将为黄精药材质量标准科学制定提供依据，并为进一步黄精药效评价、资源开发利用奠定基础。

具体的，本发明采用如下方法进行鉴别不同批次的法定基源黄精。

三种法定基源黄精的鉴别方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)供试品溶液制备；

2)UHPLC/MS分析；

3)数据统计分析。

进一步的，三种法定基源黄精的鉴别方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)供试品溶液制备：将黄精粉碎、提取，浸膏用固相萃取小柱萃取后用甲醇复溶得供试品溶液；

2)UHPLC/MS分析；

3)数据统计分析：采用HCA、PCA、PLS和/或OPLS-DA中的一种或多种进行多元统计分析。