[发明专利]一种通过均质器高效胎盘间充质干细胞的制备方法

权利要求书

1.一种胎盘来源间充质干细胞的制备方法，其特征在于：应用均质器拍打同时酶消化的方法从清洗除菌的胎盘中分离间充质干细胞。通过使用均质器分离胎盘间充质干细胞的效率高传统方法数倍，降低酶解时间，提高成功率。所获得的间充质干细胞具有与骨髓及其它间充质干细胞相似的特征，有扩增培养和多向分化潜力。

2.权利要求1中所述的胎盘可以是人自然分娩或剖腹产后废弃的胎盘，也可以是哺乳动物的胎盘。产妇或动物必须经过健康检查，无遗传性、感染性疾病，不携带致病病原体。胎盘本身必须新鲜，或放血后4℃保存2-8小时，或冷冻保存后仍然具有活力，同时离体后保持清洁无污染。

3.权利要求1中所述的清洗除菌是指胎盘从短期储存液中取出后，用PBS类的平衡盐溶液进行反复清洗并揉搓挤压，去除胎盘表面及内部的残余的血水。PBS平衡盐溶液中添加多种抗生素。抗生素可以是青霉素、链霉素、庆大霉素和两性霉素B。

4.权利要求1中所述的酶消化法是指应用胶原酶I(浓度可以是0.5-1.5％)和DNase I(浓度可以是0.5-1.5％)在37℃水浴锅中孵育消化。

5.权利要求1中所述的均质器拍打是指在37℃水浴酶解的间隙，通过均质器的拍打使组织块更容易与酶解液充分接触，促进消化的进行，大大缩短酶解的时间，获得更多的细胞。

6.权利要求1中所述的胎盘来源的间充质干细胞表面抗原标志CD73、CD90、CD105阳性，CD45、CD146阴性。细胞在相应的诱导分化试剂处理后，可以分化成为成骨细胞、成软骨细胞和成脂肪细胞等多种细胞类型。

7.权利要求1中所述的胎盘来源的间充质干细胞可以通过Ficoll密度梯度离心法得到纯化。

8.权利要求3中所述的储存液是指胎盘从产房到实验室暂时保持细胞活性的无菌液体，含有多种营养和抗生素，为含5％胎牛血清的DMEM培养基及青链霉素。

9.权利要求7中所述的Ficoll的密度可以是1.073g/mL。

10.权利要求1中所述的胎盘来源间充质干细胞可以用于细胞治疗、基因治疗，也可以作为种子细胞用于组织工程。