[发明专利]一种负载地塞米松的巨噬细胞源微囊泡及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种负载地塞米松的巨噬细胞源微囊泡及其制备方法和应用。该负载地塞米松的巨噬细胞源微囊泡由来源于鼠巨噬细胞系RAW 264.7细胞的微囊泡包载地塞米松形成。本发明负载地塞米松的巨噬细胞源微囊泡能够更加有效的被损伤细胞摄取，通过抑制促炎信号通路的活化和炎症细胞的浸润达到改善肾脏炎症的目的。同时本发明的制备方法简单、方便、高效，制备的微囊泡来源于RAW 264.7细胞，数量充足、来源广泛，可以进行规模化生产。本发明制备的负载地塞米松的巨噬细胞源微囊泡可以应用在制备治疗肾脏病的药物或者制剂中，同时还可以应用于制备抗炎或免疫抑制药物或者制剂中。

技术领域

本发明属于生物医药领域，涉及基于微囊泡的给药系统，具体涉及一种负载地塞米松的巨噬细胞源微囊泡制备方法和其在肾脏疾病抗炎治疗中的应用。

背景技术

糖皮质激素如地塞米松因具有显著的抗炎和抑制免疫的作用，故在治疗炎症和免疫性疾病中得到了广泛的应用，在肾脏病主要用于治疗急进性肾小球肾炎、肾病综合征、IgA肾病等。然而，长期大量使用糖皮质激素会导致严重的不良反应和糖皮质激素抵抗，严重阻碍了临床使用。因此，探索降低糖皮质激素不良反应，提高糖皮质激素敏感性的方法成为研究的热点。

微囊泡是多种活细胞分泌的直径约为100～1000nm的细胞外囊泡，其内包含丰富的蛋白、脂质、核酸以及来自于亲代细胞的膜受体，在多种生理和病理过程中发挥着至关重要的作用。近年来发现，细胞外囊泡作为天然稳定的纳米级膜囊泡，能够穿透生物屏障，保护其内容物不被降解，并被受体细胞高效摄取，因而可以作为基因、药物的载体，参与疾病的治疗。与其他常用的治疗载体如病毒、脂质体等相比，细胞外囊泡还具有低免疫原性、无细胞毒性等特点。

目前，专利文献CN102596177A，公开日2012.07.18，公开了来源于有核哺乳动物细胞的微囊泡，所述微囊泡比所述有核细胞小，可用于将治疗物质或诊断物质递送至特定组织或特定细胞，更具体地，该发明涉及来源于单核细胞、巨噬细胞、树枝状细胞、干细胞等等的微囊泡，所述微囊泡可用于递送治疗和/或诊断与癌症、血管疾病、炎症等相关的组织的特定治疗物质或诊断物质。但现有技术中还未见用巨噬细胞微囊泡作为地塞米松载体，实现肾脏病抗炎治疗的报道。

发明内容

发明目的：针对现有技术存在的问题，本发明提供一种负载地塞米松(DEX)的巨噬细胞源微囊泡，这种微囊泡能够更加有效的被损伤细胞摄取，通过抑制促炎信号通路的活化和炎症细胞的浸润达到改善肾脏炎症的目的。

本发明还提供所述负载地塞米松的巨噬细胞源微囊泡的制备方法和应用。

技术方案：为了实现上述目的，如本发明所述一种负载地塞米松的巨噬细胞源微囊泡，由来源于鼠巨噬细胞系RAW 264.7细胞的微囊泡包载泡地塞米松形成。本发明的负载地塞米松的巨噬细胞源微囊泡命名为微囊泡来源于鼠巨噬细胞系RAW 264.7细胞，地塞米松(DEX)包载于该囊泡内部。

本发明所述的负载地塞米松的巨噬细胞源微囊泡的制备方法，包括以下步骤：

(1)培养鼠巨噬细胞系RAW 264.7细胞；

(2)用地塞米松处理RAW 264.7细胞；

(3)收集步骤(2)中地塞米松处理细胞后的培养基上清，用差速离心的方法收集微囊泡即得到负载地塞米松的巨噬细胞源微囊泡。

其中，步骤(1)所述培养鼠巨噬细胞系RAW 264.7细胞具体过程为：将RAW 264.7细胞培养于含10％胎牛血清的RIPM 1640培养基中，置于37℃、饱和湿度、5％CO₂培养箱中培养，当细胞融合达到70％-80％时进行步骤(2)的处理。

其中，步骤(1)所述培养RAW 264.7细胞所用的胎牛血清(FBS)为去除微囊泡的胎牛血清。