[发明专利]一种基于酶反应器的活性化合物在线筛选平台及应用

权利要求书

1.一种基于酶反应器的活性化合物在线筛选平台，其特征在于：所述在线筛选平台由乙酰胆碱酯酶反应器与分离鉴定仪器连接构成；所述乙酰胆碱酯酶反应器是指固定有乙酰胆碱酯酶的有机聚合物整体柱。

2.根据权利要求1所述的一种基于酶反应器的活性化合物在线筛选平台，其特征在于：所述分离鉴定仪器是指LC-MS系统。

3.根据权利要求1所述的一种基于酶反应器的活性化合物在线筛选平台，其特征在于：所述有机聚合物整体柱是指内径为400μm、外径为800μm的大尺寸有机聚合物整体柱。

4.根据权利要求1所述的一种基于酶反应器的活性化合物在线筛选平台，其特征在于：设置失活的乙酰胆碱酯酶反应器与乙酰胆碱酯酶反应器并联作为对照；所述失活的乙酰胆碱酯酶反应器是指加热使酶失活后的乙酰胆碱酯酶反应器。

5.根据权利要求1～4任一项所述的一种基于酶反应器的活性化合物在线筛选平台，其特征在于：所述固定有乙酰胆碱酯酶的有机聚合物整体柱通过如下方法制备得到：

将功能单体、交联剂、致孔剂和引发剂混合，超声溶解、脱气后灌入到改性的石英毛细管内，将石英毛细管柱的两端封口，放入水浴中，通过热催化原位聚合反应，反应完毕后除去石英毛细管中的未反应物，得到有机聚合物整体材料，然后将乙酰胆碱酯酶溶液灌注到所得有机聚合物整体材料中进行固定化反应，得到固定有乙酰胆碱酯酶的有机聚合物整体柱。

6.根据权利要求5所述的一种基于酶反应器的活性化合物在线筛选平台，其特征在于：所述改性的石英毛细管是指采用3-(异丁烯酰氧)丙基三甲氧基硅烷改性的石英毛细管；所述的功能单体为甲基丙烯酸缩水甘油酯，交联剂为乙二醇二甲基丙烯酸酯，致孔剂为1,4-丁二醇、正丙醇和水组成的三元混合体系，引发剂为热引发剂偶氮二异丁腈。

7.根据权利要求6所述的一种基于酶反应器的活性化合物在线筛选平台，其特征在于：所述功能单体与交联剂质量比为3:2，致孔剂1,4-丁二醇:正丙醇:水＝24.26:68.90:6.84，引发剂的加入量为功能单体、交联剂及致孔剂总质量的1％，功能单体和交联剂的总质量与致孔剂的质量比为(20～40):(80～60)。

8.根据权利要求5所述的一种基于酶反应器的活性化合物在线筛选平台，其特征在于：所述乙酰胆碱酯酶溶液是指溶解于乙酸铵缓冲溶液中的乙酰胆碱酯酶溶液，乙酰胆碱酯酶溶液的浓度为0.2～1.0mg/mL；所述固定化反应的时间为3～12h。

9.权利要求1～8任一项所述的一种基于酶反应器的活性化合物在线筛选平台在天然活性成分筛选中的应用。

10.权利要求1～8任一项所述的一种基于酶反应器的活性化合物在线筛选平台在延胡索植物提取物筛选中的应用，其特征在于所述应用步骤如下：将乙酰胆碱酯酶反应器先采用缓冲溶液平衡一段时间，然后以延胡索植物提取物为样品进样，在缓冲溶液作用下除去非特异性结合成分，然后改用有机溶剂甲醇解离出与固定的乙酰胆碱酯酶特异性结合的成分，进入分离鉴定仪器进行分离鉴定。