[发明专利]一种基于酶反应器的活性化合物在线筛选平台及应用

说明书

本发明属于活性成分筛选技术领域，公开了一种基于酶反应器的活性化合物在线筛选平台及应用。所述在线筛选平台由乙酰胆碱酯酶反应器与分离鉴定仪器连接构成；所述乙酰胆碱酯酶反应器是指固定有乙酰胆碱酯酶的有机聚合物整体柱。本发明的基于酶反应器的活性化合物在线筛平台相对传统药物筛选方法，其具有操作简单、靶向性强、自动化程度高的优势，该平台集乙酰胆碱酯酶反应器亲和垂钓和LC‑MS分离鉴定于一体，可有效提高天然产物中活性化合物筛选效率。

技术领域

本发明属于活性成分筛选技术领域，具体涉及一种基于酶反应器的活性化合物在线筛选平台及应用。

背景技术

天然产物(natural product)是自然界生物在长久进化过程中经自然选择所保留下来的次生代谢物[D.H.Williams,M.J.Stone,P.R.Hauck,S.K.Rahman,Journal ofNatural Products,1989,52:1189-1208.]，其包括来源于自然界的动物、植物、海洋生物、微生物等的生物活性物质[G.M.Cragg,D.J.Newman,K.M.Snader,Journal of NaturalProducts,1997,60:52-60.]。天然产物无处不在，人类的生活也与之息息相关。天然产物因其成分多样，治疗效果显著，毒副作用低等优点，一直被广泛应用于各种人类疾病的防治中[K.Chan,Trends in Pharmacological Sciences,1995,16:182-187.；D.Normile,Asianmedicine,Science,2003,299:188-190.；R.Yuan,Y.Lin,Pharmacology andTherapeutics,2000,86:191-198.]。作为一个巨大的资源宝库，天然产物已然成为现代药物研发的重点研究对象[D.J.Newman,G.M.Cragg,Journal of Natural Products,2007,70:461-477.]。天然产物中含有数百乃至数千种具有不同结构和浓度的化合物，然而，目前仅有少数化合物被阐明其药理活性和/或毒副作用[X.Huang,L.Kong,X.Li,X.Chen,M.Guo,H.Zou,Journal of Chromatography B,2004,812:71-84.]。这主要归因于天然产物具有高度的生物多样性及结构复杂性，从而给研究者生物活性物质的筛选工作带来了极大的挑战[X.X.Yang,F.Xu,D.Wang,Z.W.Yang,H.R.Tan,M.Y.Shang,X.Wang,S.Q.Cai.,Journal ofChromatography A,2015,1413:33-46.]。

天然产物中活性化合物的筛选，最为传统的方法是以化学研究作为导向对天然化合物进行提取分离，得到尽可能多的各种结构类型的化合物，并对其结构进行分析鉴定，后续对各化合物进行活性测定[W.wang,Y.H.Zeng et al.J.Nat.Prod.2010,73,1815-1820]。虽该法在活性成分筛选上取得了显著的成果，但是其具有较大的盲目性，试验周期长且试剂消耗量大。近年来，基于亲和色谱理论的亲和垂钓筛选策略因其强靶向性而备受关注[R.J.Zhuo,H.Liu,N.N.Liu,Y.Wang,Molecules,2016,21(11):1516.]。亲和垂钓筛选策略以同疾病相关的靶蛋白酶或受体等为诱饵，直接从天然产物中准确、快速地垂钓能与之结合的配体，从而大大提高了筛选效率。