[发明专利]定量联合检测卵泡刺激素与促黄体生成素的试剂条及其使用方法

权利要求书

1.一种定量联合检测卵泡刺激素与促黄体生成素的试剂条，包括结合垫、NC膜，其特征在于：所述结合垫由鼠抗α-FSH单克隆抗体与胶体金标记形成结合物并喷涂于玻璃纤维膜上制得；所述NC膜由鼠抗β-LH单克隆抗体、鼠抗β-FSH单克隆抗体及抗鼠IgG多克隆抗体分别在硝酸纤维膜上划线并依次形成检测线T1线、检测线T2线和质控线C线制得；

所述鼠抗α-FSH单克隆抗体、鼠抗β-LH单克隆抗体和鼠抗β-FSH单克隆抗体的制备均通过采用杂交瘤技术和有限稀释法对细胞株进行克隆筛选，并在制备过程采用免疫抗原及与卵泡刺激素、促黄体生成素两种激素结构分别相似的促甲状腺素和人绒毛膜促性腺激素进行筛选；获得的杂交瘤细胞注射至小鼠体内取得腹水，再以辛酸-硫酸铵法进行各单克隆抗体的纯化，最后经双抗体夹心ELISA筛选得到鼠抗α-FSH单克隆抗体与鼠抗β-LH单克隆抗体、鼠抗α-FSH单克隆抗体与鼠抗β-FSH单克隆抗体的配对抗体。

2.根据权利要求1所述的定量联合检测卵泡刺激素与促黄体生成素的试剂条，其特征在于：所述结合垫上的结合物中每毫升胶体金标记鼠抗α-FSH单克隆抗体的质量为25～35μg。

3.根据权利要求1所述的定量联合检测卵泡刺激素与促黄体生成素的试剂条，其特征在于：所述NC膜上的质控线C线包被抗鼠IgG多克隆抗体浓度为0.3～0.6mg/mL；检测线T1线包被鼠抗β-LH单克隆抗体浓度为0.8～1.2mg/mL，检测线T2线包被鼠抗β-FSH单克隆抗体浓度为1.2～1.8mg/mL。

4.根据权利要求1所述的定量联合检测卵泡刺激素与促黄体生成素的试剂条，其特征在于：所述鼠抗α-FSH单克隆抗体、鼠抗β-LH单克隆抗体和鼠抗β-FSH单克隆抗体均经由以下方法获得：

a、单克隆抗体的制备与纯化：分别以人α-FSH蛋白、人β-LH蛋白和人β-FSH蛋白作为免疫抗原，免疫6周龄健康BALB/c雌性小鼠，采用杂交瘤技术制备、筛选单克隆抗体细胞株，在筛选过程中还选用与卵泡刺激素、促黄体生成素两种激素结构分别相似的促甲状腺素和人绒毛膜促性腺激素作为非特异性抗原进行筛选；筛选得到的特异性抗体细胞株注射到小鼠体内制备腹水，再将腹水经辛酸-硫酸铵沉淀法纯化获得单克隆抗体；

b、单克隆抗体的筛选：经步骤a得到的单克隆抗体细胞株，需经ELISA检测效价均在20*10⁴以上，亚型分别为IgG1、IgG2a、IgG2b；经蛋白纯化，得到纯化后蛋白含量为18.8～35.4mg/ml；经ELISA相加试验检测得到配对抗体，要求相加指数AI均在95％以上。

5.根据权利要求1所述的定量联合检测卵泡刺激素与促黄体生成素的试剂条，其特征在于：所述试剂条主要由背衬、样品垫、结合垫、NC膜及吸收垫经组装、切割制得。

6.根据权利要求1所述的定量联合检测卵泡刺激素与促黄体生成素的试剂条，其特征在于：所述试剂条对卵泡刺激素的检测范围为10～200mIU/mL，对促黄体生成素的检测范围为10～200mIU/mL。