[发明专利]定量联合检测卵泡刺激素与促黄体生成素的试剂条及其使用方法

说明书

本发明公开了一种定量联合检测卵泡刺激素与促黄体生成素的试剂条，包括结合垫、NC膜，所述结合垫由鼠抗α‑FSH单克隆抗体与胶体金标记形成结合物并喷涂于玻璃纤维膜上制得；所述NC膜由鼠抗β‑LH单克隆抗体、鼠抗β‑FSH单克隆抗体及抗鼠IgG多克隆抗体分别在硝酸纤维膜上划线并依次形成检测线T1线、检测线T2线和质控线C线制得。采用本发明的试剂条，实现了对血清中卵泡刺激素与促黄体生成素的联合定量检测，不仅提供了便捷、准确的检测方法，还为寻找高敏感度、特异度肿瘤标志物及血清参考值范围提供理论依据，以利于早期卵巢癌的辅助诊断，对于卵巢癌的诊断研究具有显著的应用意义。

技术领域

本发明涉及免疫检测技术领域，尤其涉及一种定量联合检测卵泡刺激素与促黄体生成素的试剂条，以及该试剂条的使用方法。

背景技术

卵巢癌是目前死亡率最高的妇科恶性肿瘤，其中浆液性肿瘤最为常见，据统计，70％的浆液性卵巢癌患者就诊时已处于晚期，因此提高卵巢癌患者的早期诊断率十分必要，而目前在卵巢癌的早期诊断技术方面存在诸多不足，如卵巢癌在无转移即只局限于卵巢时，超声及其他影像学方法较难诊断；当前对卵巢癌的确诊主要依赖于病理活检，但活检存在有创性及不适于大规模筛查的缺点；另外，在卵巢癌的诊断和评估预后的肿瘤标志物中，血清CA125及血清HE4的作用最为重要，但其敏感度、特异度相对较低。

随着流行病学的研究发现，体内卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH)的水平有可能参与卵巢癌的发展。体外实验证实FSH、LH能够促进卵巢癌细胞增殖、迁移及侵袭，抑制卵巢癌细胞凋亡，诱导卵巢上皮组织发生上皮间质转化；上皮性卵巢癌患者血清及囊性肿物液体内的FSH、LH值均明显高于其他对照组；复发组卵巢癌患者血清FSH水平显著高于原发组等；都提示着FSH、LH参与卵巢癌的发展。目前国内外对于FSH、LH与卵巢癌的研究主要侧重于机制方面，而对于血清FSH、LH与卵巢癌临床病理特征、患者预后及两者联合检测预测卵巢癌价值的研究较少。

发明内容

为解决现有技术存在的不足，本发明提供了一种定量联合检测卵泡刺激素与促黄体生成素的试剂条，该试剂条可用于同时定量检测血清中卵泡刺激素与促黄体生成素水平，而且检测方法便捷、检测结果准确，对于卵巢癌的诊断研究具有显著的应用意义。

为实现上述目的，本发明提供的定量联合检测卵泡刺激素与促黄体生成素的试剂条，包括结合垫、NC膜，所述结合垫由鼠抗α-FSH单克隆抗体与胶体金标记形成结合物并喷涂于玻璃纤维膜上制得；所述NC膜由鼠抗β-LH单克隆抗体、鼠抗β-FSH单克隆抗体及抗鼠IgG多克隆抗体分别在硝酸纤维膜上划线并依次形成检测线T1线、检测线T2线和质控线C线制得；

所述鼠抗α-FSH单克隆抗体、鼠抗β-LH单克隆抗体和鼠抗β-FSH单克隆抗体的制备均通过采用杂交瘤技术和有限稀释法对细胞株进行克隆筛选，并在制备过程采用免疫抗原及与卵泡刺激素、促黄体生成素两种激素结构分别相似的促甲状腺素和人绒毛膜促性腺激素进行筛选；获得的杂交瘤细胞注射至小鼠体内取得腹水，再以辛酸-硫酸铵法进行各单克隆抗体的纯化，最后经双抗体夹心ELISA筛选得到鼠抗α-FSH单克隆抗体与β-LH单克隆抗体、鼠抗α-FSH单克隆抗体与β-FSH单克隆抗体的配对抗体。