[发明专利]促内皮细胞成血管的外泌体活性制剂及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种促内皮细胞成血管的外泌体活性制剂及其制备方法和应用，制备方法包括以下步骤：分离原代脐带静脉内皮细胞并进行细胞培养及传代；向传代培养的内皮细胞培养液中加入山莨菪碱对内皮细胞进行处理，然后更换新的内皮细胞培养液继续培养内皮细胞；自内皮细胞培养后得到的内皮细胞培养液中提取外泌体；外泌体鉴定。本发明制备方法制备的促内皮细胞成血管的外泌体活性制剂及其在制备治疗微血管损伤、微循环障碍和心脑梗塞药物中的应用。本发明制备方法简单，制备的外泌体能够促进内皮细胞成血管。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体涉及促内皮细胞成血管的外泌体活性制剂及其制备方法和应用。

背景技术

微循环是微动脉与微静脉之间毛细血管中的血液循环,是循环系统中最基层的结构和功能单位，它包括微动脉,微静脉,毛细淋巴管和组织管道内的体液循环。人体每个器官,每个组织细胞均要由微循环提供氧气,养料,传递能量,交流信息,排除二氧化碳及代谢废物，一旦人体的微循环发生障碍,其相应的组织系统或内脏器官就会受到影响而不能发挥正常功能,就容易导致人体的衰老,免疫功能的紊乱以及疾病的发生。

微循环障碍是疾病发生和发展的重要病理生理学基础。微循环功能是保证人体脏器发挥正常功能的首要前提，医学已证明：微循环发生障碍会使很多人处于亚健康状态，肿瘤、高血压、糖尿病及许多心脑血管等重大慢病均与微循环障碍有关，因此微循环功能也是人体是否健康的重要标志。

故此，改善微循环能够从机体整体的角度提高对疾病治疗的疗效，以及能够通过改善微循环纠正微循环障碍达到辅助治疗疾病的目的。微循环障碍治疗法能迅速改善全身组织的供血供氧功能，降低血脂和血粘度，增加新陈代谢，提高机体免疫力，对心脑血管病、高脂血症等多种疾病有显著的疗效。治疗心梗和脑卒中的基本原则又在于梗死后的侧支通路再建，而侧支的再建主要取决于血管的新生。

随着细胞外泌体的研究日益深入，外泌体药物制剂越来越成为疾病治疗研究的热点，外泌体(exosomes)是一种由活细胞分泌并释放到胞外环境中、大小在60--100nm的运输膜泡。外泌体以其天然的物质转运特性、相对较小的分子结构和优良的生物相容性,可递送化学药物、蛋白质及肽配基和基因药物等多种药物,在药物载体的领域具有巨大的潜力。

近年来,作为天然的胞间信息载体的外泌体,以其相对较小的分子结构、天然的分子转运特性和良好的生物相容性,在药物载体领域具有巨大的应用潜力。对于药物载体的选择,有两个基本原则:保护内含的药物在体内环境中仍保持活性；在不引发机体对药物载体产生免疫反应的情况下释放内含物。较之现有的药物载体(如人工制造的脂质体),外泌体有其显著的优越性。首先,外泌体有自身天然的内含物,可以转移至受体细胞并功能性改变受体细胞,且不同来源的外泌体表面分子不一样,对受体细胞有一定选择性,在治疗上更有利。其次,相对于脂质体对亲水性物质较低的包装效率,其在递送核酸方面受到限制,而外泌体可以更好地亲和核酸分子,显著提高包装效率。外泌体免疫原性低能够避免与调理素蛋白、抗体、凝血因子等产生相互作用,从而避免了体内产生免疫反应。

采用外泌体药物改善微循环就越发具有优势，因为微循环是遍布机体的微小血循环，经血液循环的外泌体药物更容易达到血管细胞，达到治疗目的。心脑血管疾病中，伴随着产生肿瘤坏死因子(TNF-α)等影响血管新生的炎性因子产生，能够在TNF-α等炎性因子环境下形成新的微血管是缺血治疗中的重要内容。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供促内皮细胞成血管的外泌体活性制剂及其制备方法和应用。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：促内皮细胞成血管的外泌体活性制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)分离原代脐带静脉内皮细胞并进行细胞培养及传代；

(2)向传代培养的内皮细胞培养液中加入山莨菪碱对内皮细胞进行预处理，然后更换新的内皮细胞培养液继续培养内皮细胞；