[发明专利]梅花垂枝性状SNP分子标记及其应用

权利要求书

1.梅花垂枝性状SNP分子标记，其特征在于，包括分子标记Marker301243，或者包括分子标记Marker301243和Marker311414；，分子标记Marker301243的核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示，SNP位点位于SEQ ID NO.1所示序列的第426位，该处碱基为T或A；分子标记Marker311414的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，SNP位点位于SEQ ID NO.2所示序列的第607位，该处碱基为G或A。

2.用于扩增权利要求1所述分子标记的特异性PCR引物，其特征在于，

标记Marker301243引物序列为：

正向引物：5′-TGAGAATGGACAATGAGCGT-3′，

反向引物：5′-CTCTGCTGGACACCCCTAAT-3′；

标记Marker311414引物序列为：

正向引物：5′-CTTAGGGAATGGTGTCGCTT-3′，

反向引物：5′-AGAGCAGGCACCCAAGTAAGT-3′。

3.权利要求1所述分子标记在鉴定梅花垂枝性状中的应用，其特征在于，包括以下步骤：

1)提取待测梅花的基因组DNA；

2)以待测植株的基因组DNA为模板，利用权利要求1所述分子标记的引物，进行PCR扩增反应；

3)对应于标记Marker301243的SNP位点，位于SEQ ID NO.1所示序列的第426位碱基，该处碱基为T或A，梅花垂枝的优势等位基因型为TT，直枝的优势等位基因型为AT；对应于标记Marker311414的SNP位点，位于SEQ ID NO.2所示序列的第607位碱基，该处碱基为G或A，梅花垂枝的优势等位基因型为GG，直枝的优势等位基因型为GA。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，步骤2)中的PCR扩增体系为20μL，包括：50ng/μL模板DNA 2μL，2×PCR Master Mix 10μL，10μmol/L正反向引物各1μL，ddH₂O 6μL。

5.用于AS-PCR扩增权利要求1分子标记的AS-PCR引物，其特征在于，

标记Marker301243引物序列为：

正向引物：5′-TGGAAACTGAATAGATGCGAT-3′，

反向公共引物：5′-GGTGAAAGAGACATCAGAAAAT-3′，

正向特异性引物：5′-TGGAAACTGAATAGATGCGAA-3′；

标记Marker311414引物序列为：

正向公共引物：5′-CATCTAAAATAAAATCTCAAAGG-3′，

反向引物：5′-TCATAGGTATTCTTGTCTTTCTC-3′，

反向特异性引物：5′-TCATAGGTATTCTTGTCTTTCTT-3′。

6.一种筛选或鉴定梅花垂枝性状的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)提取待测梅花的基因组DNA；

2)以待测植株的基因组DNA为模板，利用权利要求1所述分子标记的AS-PCR引物，进行AS-PCR扩增；

3)检测PCR扩增产物，根据AS-PCR扩增产物条带的有无，判断对应的SNP位点，其中，对应于标记Marker301243的SNP位点，梅花垂枝的优势等位基因型为TT，直枝的优势等位基因型为AT；对应于标记Marker311414的SNP位点，梅花垂枝的优势等位基因型为GG，直枝的优势等位基因型为GA。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤2)中AS-PCR扩增体系为10μL，包括：50ng/μL模板DNA 1μL，2×PCR Master Mix 5μL，10μmol/L正反向引物各0.5μL，ddH₂O 3μL。

8.含有权利要求2和/或权利要求5所述引物的用于筛选或鉴定梅花垂枝性状的检测试剂盒。