[发明专利]一种发酵乳中免疫活性肽及其富集方法和应用

说明书

本发明公开了一种发酵乳中免疫活性肽BP₁，所述活性肽BP₁的氨基酸序列为NQFLPYPYYAKPA，该活性肽BP1能够显著促进细胞因子TNF‑α、IL‑6的分泌，具有良好的免疫促进作用。本发明还公开了该活性多肽的富集方法，本发明以活性肽BP₁含量为指标，通过响应面法优化牛乳发酵参数，最终得到活性肽BP₁含量达到0.213 mg/mL，显著优于常规发酵技术，该方法可用于提高发酵乳中免疫活性肽含量，为进一步探索发酵乳中提取生物活性肽提供工艺指导，对开发具有免疫调节功能的乳制品和保健品具有重要的意义。

技术方案

本发明属于生物工程领域，具体涉及一种发酵乳中免疫活性肽及其富集方法和应用。

背景技术

生物活性肽是一类对机体功能或状态具有积极的影响，并最终对机体健康状况产生良性作用的特定蛋白片段。摄入生物活性肽，可以对机体的心血管系统、消化系统、免疫系统和神经系统产生积极的影响。这些特定生物活性肽降低了罹患临床疾病的危险，促进机体自身免疫并改善人体的健康状况，因此它们受到功能食品研究领域的普遍关注。

乳蛋白主要包括酪蛋白、乳清蛋白和少量的乳铁蛋白以及其他蛋白成分，是最重要的生物活性肽来源。乳蛋白在胃肠道被消化，继而可以从非活性的天然蛋白序列中释放出活性肽，此外，在体外通过酶解释放形成活性肽，但制备效率低、成本高。近年来已经鉴定出几十种具有重要生理功能的生物活性肽，包括：阿片肽、抗菌肽、抗氧化肽、抗血栓肽、抗高血压肽、免疫调节肽和磷酸肽等，它们的生物活性基于其内在的氨基酸组成，序列大小由二到几十个氨基酸残基不等。目前还有大量乳源活性肽尚未被发掘，另一方面，如何高效释放乳蛋白中的活性多肽序列并在乳及乳制品中富集尚无有效手段。随着人们健康意识的增强以及对功能食品需求的增长，富含生物活性肽的乳制品具有强大的发展潜力。在欧美国家和日本通过酶解活性肽作为添加剂强化乳制品的功能，但是产品价格十分昂贵。

乳酸菌作为一类被公认为最安全的微生物且长期应用于多种发酵食品，安全性高，并且与商品酶高昂的价格相比，成本更为低廉且来源广泛。乳酸菌发酵过程中产生的蛋白酶可以降解蛋白质，将酸乳发酵生产和乳蛋白活性肽的酶解产生结合在一起，极大降低了乳蛋白肽的生产成本，同时还可以赋予产品特有的风味。研制开发这种以保健功能为主兼具营养特点的创新型乳产品，弥补传统酸奶产品保健功能不明显的缺陷，可使乳业价值链向保健产品方向延伸。然而，由于微生物酶系十分复杂，形成的活性肽种类繁杂、浓度很低，如何富集和累积特定功能的多肽已经成为迫切需要解决的问题。

发明内容

发明目的：本发明所要解决的技术问题是应用不同乳酸菌菌株作为发酵剂，通过提取发酵乳中的小分子多肽，应用层析分离和体外淋巴细胞诱导增殖模型分析多肽提取物的免疫调节作用，分离鉴定其中的高丰度活性肽段，结果得到一条新型免疫调节肽序列即发酵乳中免疫活性多肽BP₁。

本发明还要解决的技术问题是提供了并提供了发酵乳中免疫活性多肽BP₁的富集方法，具体包括了乳制品中的该免疫调节肽的高效富集和累积等发酵参数。

本发明最后要解决的技术问题是提供了上述发酵乳中免疫活性多肽BP₁的应用。

技术方案：为了解决上述技术问题，本发明提供了一种发酵乳中免疫活性肽BP₁，所述活性肽BP₁的氨基酸序列为NQFLPYPYYAKPA，该序列参见序列表SEQ ID NO：1。

进一步地，所述活性肽BP₁来源于κ-酪蛋白，分子量为1572D。

本发明内容还包括所述的发酵乳中免疫活性肽BP1的富集方法，包括以下步骤：

1)脱脂乳发酵：将活化的嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌菌液接种到脱脂乳培养基中，42℃培养6-10h，发酵结束后取出离心，离心后取上清液，得到多肽混合物；