[发明专利]用于检测犬瘟热病毒抗原的免疫荧光层析检测卡与制备方法

权利要求书

1.一种用于检测犬瘟热病毒抗原的免疫荧光层析检测卡，包括底板(1)，在底板(1)上依次衔接有样品垫(2)、结合垫(3)、硝酸纤维膜(4)和吸水垫(5),其特征在于，所述结合垫(3)上设有荧光微球标记的CDV单克隆抗体(31)和荧光微球标记的羊抗鸡IgY(32)，所述的硝酸纤维膜(4)设有一条包被鸡IgY的质控C线，以及一条包被CDV单克隆抗体的检测T线。

2.根据权利要求1所述的一种检测犬瘟热病毒抗原的免疫荧光层析检测卡，其特征在于，还包括样品稀释瓶(6)。

3.根据权利要求2所述的一种检测犬瘟热病毒抗原的免疫荧光层析检测卡，其特征在于，所述样品稀释瓶(6)内装有样品稀释液，所述样品稀释液为含0.8％S21、0.03％Proclin300的0.01M的pH7.4磷酸盐缓冲液。

4.制备权利要求1所述的一种用于检测犬瘟热病毒抗原的免疫荧光层析检测卡的方法，在底板(1)上依次衔接有样品垫(2)、结合垫(3)、硝酸纤维膜(4)和吸水垫(5)，其特征在于：

A)所述的样品垫的制备方法为：

1)配制样品垫处理液：含0.5％S9、0.05％酪蛋白钠、0.3％PVP和0.5％TritonX-305的0.01MpH8.0硼酸盐缓冲液；

2)将步骤1)中制备的缓冲液10μl/cm的浓度喷涂于玻璃纤维上；

B)所述的结合垫(3)的制备方法为：

1)将用荧光微球标记的CDV单克隆抗体和用荧光微球标记的羊抗鸡IgY按照体积比20:1混合均匀，超声2s，间歇5s，重复3次；

2)按3.5μl/cm、0.02MPa喷至剪裁后的结合垫上；

C)所述的反应膜的制备方法为：

1)用含3％蔗糖的pH7.4的0.01M的磷酸盐缓冲液将鸡IgY稀释到1mg/mL，即为C质控线工作液；

2)用含3％蔗糖的pH7.4的0.01M的磷酸盐缓冲液将CDV单克隆抗体稀释到1mg/mL，即为T检测线工作液；

3)取底板(1)粘贴硝酸纤维膜；

4)在硝酸纤维膜上划T线和C线，划线浓度均为1μL/cm；

5)完成后将片材放置在37℃干燥箱中干燥过夜。

5.根据权利要求4所述的一种用于检测犬瘟热病毒抗原的免疫荧光层析检测卡的制备方法，其特征在于，荧光微球标记的CDV单克隆抗体的制备方法为：

1)稀释荧光微球：取一离心管，加入1mL标记缓冲液，加入荧光微球1mg，涡旋混匀；

2)微球的活化：在上述离心管中加入20μl-50μl标记活化剂A和20μl-50μl标记活化剂B，旋转培养器上反应30min；

3)活化淬灭：将活化后的荧光微球20000g离心30min，弃上清，留取沉淀，加入500μl淬灭剂，超声2s；

4)抗体的标记：在超声重悬后的荧光微球中加入20-200μg CDV单克隆抗体，涡旋混匀，置于旋转培养器上反应30min；

5)封闭：加入2mL标记封闭液，超声2s，间歇5s，重复3次，超声完成后置于旋转培养器上反应30min；

6)纯化：完成上述反应后，19000g离心30min，吸去上清，留取沉淀，加入2mL标记荧光微球稀释液，超声，工作2S，间歇5S，重复3次。