[发明专利]用于检测犬瘟热病毒抗原的免疫荧光层析检测卡与制备方法

说明书

本发明公开了一种用于检测犬瘟热病毒抗原的免疫荧光层析检测卡及其制备方法；旨在提供一种灵敏度高，检测结果可靠的用于检测犬瘟热病毒抗原的免疫荧光层析检测卡；其技术要点包括底板，在底板上依次衔接有样品垫、结合垫、硝酸纤维膜和吸水垫,所述结合垫上设有荧光微球标记的CDV单克隆抗体和荧光微球标记的羊抗鸡IgY，所述的硝酸纤维膜设有一条包被鸡IgY的质控C线，以及一条包被CDV单克隆抗体的检测T线；属于动物疫病检测领域。

技术领域

本发明公开了一种免疫荧光层析检测卡，具体地说，是一种用于检测犬瘟热病毒抗原的免疫荧光层析检测卡，本发明还公开了该免疫荧光层析检测卡的制备方法。

背景技术

犬瘟热(CD)是世界范围内广泛发生的一种犬的急性、高接触性的病毒传染病，其病原为犬瘟热病毒(CDV)，隶属于副黏病毒科麻疹病毒属，其自然宿主包括大部分的食肉目动物。

早期双相热型、急性鼻卡他及随后的支气管炎、卡他性肺炎、严重的胃肠炎和神经症状为特征，有些患病动物的鼻和足垫还表现过度角化。也是一种传染性强，临床症状多样，容易继发细菌和其他病毒的混合感染或继发感染，发病率高达80％，患病动物在康复后还易留有麻痹、抽搐、癫痫样发作等后遗症。常规免疫接种在正常情况下是一种高度有效的预防保护措施，但据报道，犬瘟热在德国、法国、日本、美国和芬兰等国家常规免疫执行很好的地区也会有不同程度的流行，这表明预防接种过的犬也可能发病，而发病机制可能存在新的变化。

近几年，随着我国军犬、警犬、实验用犬和宠物犬饲养量的大幅增加，以及异地交流的增多，犬瘟热在我国犬中的发病率和致死率均有升高的趋势，而且临床表现也与以往有所不同。病犬以呈现双相热型、鼻炎、严重的消化道障碍和呼吸道炎症等为特征。幼犬的死亡率在90％以上，成犬的死亡率在50％以上。少数病例可发生脑炎。除犬科动物外，鼬科、浣熊科及大熊猫科等多种动物也可感染发病。因此，CDV是当前对宠物饲养业、经济动物养殖业和动物园观赏业危害最大的疫病。

中国专利201711054386.4公开了一种犬瘟热病毒抗体快速定量检测卡及使用方法，包括检测卡外壳和装配在检测卡外壳内的试纸条，所述试纸条包括带压敏胶的塑料底板，在底板上依次粘贴样品垫、标记物垫、硝酸纤维膜和吸水纸，所述标记物垫由载体基层和标记物组成，标记物为载体基层上喷涂镧系荧光检测微球和镧系荧光质控微球形成的一层膜，所述硝酸纤维膜上包被犬瘟热病毒重组抗原为检测线，包被兔抗鸡lgY抗体为质控线，标记物为标记有犬瘟热病毒结构蛋白H蛋白的重组抗原的荧光检测微球和标记鸡lgY抗体的荧光质控微球。但是该检测试剂开需要先行制备H蛋白，其步骤繁琐，所需要的试剂原料成本较高，并且需要专业人员进行蛋白的合成。另外该检测试剂检测是样本的犬瘟热病毒抗体，不能直接检测犬粪便中的病毒性抗原，不利于疾病早期快速诊断与治疗。

中国专利201310562376.7公开了一种犬瘟热病毒抗原化学发光检测试剂盒，其方案包括设置在盒体内的包被板和试剂，所述试剂包括辣根过氧化酶标记羊抗鼠的抗体、包被溶液、封闭溶液、洗涤液和化学发光液，所述包被板为包被有犬瘟热病毒抗体的发光板，所述犬瘟热病毒抗体的稀释度为1：700-1000，辣根过氧化酶标记羊抗鼠的抗体稀释度为1：2500；所述发光板为乳白色不透明聚苯乙烯96孔化学发光板；所述犬瘟热病毒抗体的包被是将犬瘟热病毒抗体置于0.1mol/L的包被溶液中，在4℃的温度下反应包被12h，然后采用封闭溶液密封于发光板上的孔内；所述包被溶液为碳酸钠和碳酸氢钠溶于水中制成的碳酸盐缓冲液，且碳酸根的浓度为0.1mol/L；所述封闭溶液为每100mL水中加入10g的BSA制成的BSA溶液，然后向其中依次加入BSA溶液重量5％的脱脂奶粉、1％的明胶和0.05％的NaN3。但是该检测试剂盒的线性范围并不高，专利未能公开试剂的剂量反应曲线；采用辣根过氧化酶标记羊抗鼠的抗体，特异性可能受到影响。另外整个操作非常繁琐费时，需要样品稀释、加样、洗涤、加酶标羊抗鼠的抗体、洗涤、加发光液、检测等一系列步骤，不利于疾病早期快速诊断与治疗。

发明内容