[发明专利]一种医用生物敷料及其制备方法

权利要求书

1.一种医用生物敷料的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)对大鲵皮肤进行剥离，得到全厚皮片；

(2)对所述全厚皮片进行超低温冷冻处理；

(3)解冻后在缓冲液I中浸泡清洗1-3次，缓冲液I的有效成分为：L-抗坏血酸10-200mM，青链霉素混合液500ppm，无菌磷酸盐缓冲盐水；

(4)去除清洗后全厚皮片的表皮层和外周的真皮疏松结缔组织，得到中间皮片；

(5)使用复合碱性清洗剂I和缓冲液II对中间皮片清洗1-3次，其中复合碱性清洗剂I的有效成分为：氢氧化钠15-25mg/mL，助剂为：偏硅酸钠30-60mg/mL，碳酸钠15-30mg/mL；

(6)使用表面活性剂处理清洗后的中间皮片；

(7)使用固定剂I和固定剂II对经步骤(6)处理的中间皮片进行固定处理，固定剂I有效成分为：含谷氨酰胺0.1-4mM的Hank's平衡盐溶液；

(8)使用复合酶对经步骤(7)处理的中间皮片的致密纤维层进行消化，复合酶的主要成分为：氯化钠100-150mM，氯化钾3-6mM，磷酸氢二钠0.1-1.5mM，葡萄糖3-10mM，EDTA 0.5-3mM，胰蛋白酶0.01-5g/L，链霉蛋白酶0.01-5g/L，木瓜凝乳蛋白酶0.01-5g/L；

(9)使用漂白剂对经步骤(8)处理的中间皮片进行漂白处理；

(10)将经步骤(9)处理的中间皮片浸泡于含有葡聚糖5-15mM、蔗糖2-10mM、EDTA 0.5-3mM的冷冻保护液中，冷冻保存，即得。

2.根据权利要求1所述医用生物敷料的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)对大鲵皮肤剥离得到全厚皮片的方法为：对大鲵的皮肤进行初步清洗，去除表面分泌抗菌肽，使用取皮刀对大鲵躯干背侧区域进行取皮操作，取皮厚度为1300-1500μm，包含全部表皮层、真皮层及皮下少量脂肪，然后将取下的皮片置入4℃的PBS中浸泡5－12分钟，重复3次后吸去多余水分备用。

3.根据权利要求1所述医用生物敷料的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)超低温冷冻处理的降温速度为0.5-10℃/分钟，冷冻温度为-80至-196℃，冷冻时间为1-3小时。

4.根据权利要求1所述医用生物敷料的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)解冻的温度为60-100℃；所述浸泡清洗的温度为2-8℃，每次浸泡清洗时间为30-90分钟。

5.根据权利要求1所述医用生物敷料的制备方法，其特征在于，所述步骤(5)的缓冲液II有效成分为：氯化钠100-150mM，氯化钾3-6mM，硫酸镁0.1-1.5mM，氯化镁0.1-1.5mM，磷酸氢二钠0.1-1.5mM，磷酸二氢钾0.1-1.5mM，碳酸氢钠2-6Mm。

6.根据权利要求1所述医用生物敷料的制备方法，其特征在于，所述步骤(6)的表面活性剂为含有0.1-1％X-100的杜氏磷酸盐缓冲液。

7.根据权利要求1所述医用生物敷料的制备方法，其特征在于，所述步骤(7)的固定剂II有效成分为：含十二烷基硫酸钠0.01-1％的Hank's平衡盐溶液。

8.根据权利要求1所述医用生物敷料的制备方法，其特征在于，所述步骤(7)的固定方法为：先将经步骤(6)处理的中间皮片放入固定剂I中，以20-80rpm的速度水平摇床孵育5-15分钟，倒去固定剂I，然后放入固定剂II中，以20-80rpm的速度摇床孵育30-90分钟，固定温度为15-25℃。

9.根据权利要求1所述医用生物敷料的制备方法，其特征在于，所述步骤(8)的消化温度为15-25℃，消化时间为15-20小时。

10.根据权利要求1所述医用生物敷料的制备方法，其特征在于，所述步骤(9)所使用的漂白剂的主要成分为：过氧化氢1-5％，氢氧化钠5-25g/L，EDTA 0.5-3mM。