[发明专利]一种测定肠粘膜损伤的联合检测试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种测定肠粘膜损伤的联合检测试剂盒，其特征在于：包括免疫层析试纸条，所述免疫层析试纸条包括底板(1)，底板(1)的一面上顺序搭接有吸水垫(2)、检测垫(3)、标记垫(4)、第一样品垫(5)和第二样品垫(6)，检测垫(3)上设有检测线T1、检测线T2和质控线，检测线T1上包被有钙卫蛋白单克隆抗体，检测线T2上包被有血红蛋白单克隆抗体，质控线上包被有羊抗鼠或羊抗兔IgG，标记垫(4)上包被有量子点标记的钙卫蛋白单克隆抗体与量子点标记的血红蛋白单克隆抗体的混合物，所述量子点标记的钙卫蛋白单克隆抗体为量子点荧光微球标记的钙卫蛋白单克隆抗体与量子点修饰物标记的钙卫蛋白单克隆抗体混合而成，所述量子点标记的血红蛋白单克隆抗体为量子点荧光微球标记的血红蛋白单克隆抗体与量子点修饰物标记的血红蛋白单克隆抗体混合而成，所述量子点荧光微球的粒径与量子点修饰物的粒径不同。

2.根据权利要求1所述的测定肠粘膜损伤的联合检测试剂盒，其特征在于：所述量子点荧光微球为量子点与微球的复合物，量子点荧光微球表面带有基团，其粒径为150-180nm，所述量子点修饰物为量子点表面经基团修饰而成，其粒径为20-50nm，所述量子点为硅、锗、硫化镉、碲化镉、硒化锌、硫化铅、硒化铅、砷化铟、硒化镉或膦化铟，所述微球为聚苯乙烯微球、聚甲基丙烯酸酯微球、聚乙烯甲苯微球或二氧化硅微球。

3.根据权利要求2所述的测定肠粘膜损伤的联合检测试剂盒，其特征在于：所述基团为羧基，量子点荧光微球标记的钙卫蛋白单克隆抗体与量子点修饰物标记的钙卫蛋白单克隆抗体的混合比例为1:0.1-10。

4.根据权利要求1所述的测定肠粘膜损伤的联合检测试剂盒，其特征在于：检测垫(3)的材质为硝酸纤维素膜，标记垫(4)的材质为玻璃纤维素。

5.根据权利要求1所述的测定肠粘膜损伤的联合检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒对钙卫蛋白的检测灵敏度达到0.1ng/ml，对血红蛋白的检测灵敏度达到5ng/ml。

6.一种权利要求1所述的测定肠粘膜损伤的联合检测试剂盒的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

(Ⅰ)标记垫(4)的制备

取量子点荧光微球标记的钙卫蛋白单克隆抗体与量子点修饰物标记的钙卫蛋白单克隆抗体按照1:0.1-10的比例混合，形成量子点标记的钙卫蛋白单克隆抗体，取量子点荧光微球标记的血红蛋白单克隆抗体与量子点修饰物标记的血红蛋白单克隆抗体按照1:0.1-10的比例混合，形成量子点标记的血红蛋白单克隆抗体，将量子点标记的钙卫蛋白单克隆抗体与量子点标记的血红蛋白单克隆抗体按照1:1的比例混合，将混合液喷涂在玻璃纤维素垫上，干燥，备用；

(Ⅱ)检测垫(3)的制备

取硝酸纤维素膜，间隔划出检测线T1、检测线T2和质控线，检测线T1上包被钙卫蛋白单克隆抗体，检测线T2上包被血红蛋白单克隆抗体，质控线上包被羊抗鼠或羊抗兔IgG，将包被好的硝酸纤维素膜干燥，备用；

(Ⅲ)免疫层析试纸条制备

在底板(1)上依次搭接吸水垫(2)、检测垫(3)、标记垫(4)、第一样品垫(5)和第二样品垫(6)，组装完毕后剪切成条即可；

(Ⅳ)试剂盒组装

将试纸条装入塑料板卡上，扣上上盖，密封保存。

7.根据权利要求6所述的测定肠粘膜损伤的联合检测试剂盒的制备方法，其特征在于：步骤(Ⅰ)中，量子点荧光微球标记的钙卫蛋白/血红蛋白单克隆抗体与量子点修饰物标记的钙卫蛋白/血红蛋白单克隆抗体的制备方法为：取量子点荧光微球或量子点修饰物，加入标记缓冲液中，混匀后，分别使用不同的活化缓冲液活化，活化完成后，加入钙卫蛋白单克隆抗体或血红蛋白单克隆抗体，超声混匀并振荡反应，然后加入封闭缓冲液进行封闭反应，最后离心去上清液，对沉降的固体重悬，超声混匀即可。

8.根据权利要求7所述的测定肠粘膜损伤的联合检测试剂盒的制备方法，其特征在于：所述标记缓冲液为4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液，所述活化缓冲液为N-羟基琥珀酰亚胺活化缓冲液和碳二亚胺活化缓冲液，所述封闭缓冲液为甘氨酸溶液和酪蛋白钠溶液。