[发明专利]一种高效微生态混合肥的制备方法

权利要求书

1.一种高效微生态混合肥的制备方法，其特征在于，将如下重量份数的菌剂混合或混合后制粒：解磷巨大芽孢杆菌菌剂5份，枯草芽孢杆菌培养物25份，黑曲霉培养物10份，植物乳杆菌剂12份，所述枯草芽孢杆菌保藏编号为CGMCC No.7926，所述黑曲霉保藏编号为CGMCC No.7927，所述植物乳杆菌保藏编号为CICC No.20261；

(1)所述枯草芽孢杆菌培养物的制备方法如下：

①一级种子培养：将枯草芽孢杆菌斜面菌种接入500毫升摇瓶中，培养基装量100毫升，旋转式摇床180转/分，培养温度30℃，培养时间24小时；

②二级种子培养：将一级种子按照10％的接种量接入500毫升二级种子摇瓶中，培养条件与一级种子相同；

③三级种子培养：将二级种子以10％接种量接入5000毫升三级种子摇瓶中，培养基装量1000毫升，旋转式摇床100转/分，培养温度30℃，培养时间24小时；

④一级种子罐培养：将三级种子以10％接种量接入总容积为150L的一级种子罐，发酵培养基装量100L，培养温度28℃，搅拌速度100转/分，通风量(V/V)1∶0.5，罐压0.05MPa，培养时间24小时；

⑤发酵培养：将一级种子罐菌种以10％接种量接入总容积为1.5吨二级种子罐，发酵培养基装量1吨，培养条件：培养温度28℃，搅拌速度100转/分，通风量(V/V)1∶0.5，罐压0.05MPa，培养时间24小时；

(2)所述黑曲霉培养物制备方法如下：菌种培养，固体发酵培养：孢子液接种到固态发酵培养料中，26-33℃培养至菌丝长满培养料，低温流化床干燥，粉碎干燥物；采用常见固态发酵法制备获得。

2.根据权利要求1所述的一种高效微生态混合肥的制备方法，其特征在于，所述黑曲霉CGMCC No.7927的培养学特征为：

黑曲霉CGMCC No.7927在麦芽汁琼脂培养基上生长迅速，28℃4天孢子铺满斜面；质地丝绒状或稍带絮状；分生孢子结构大量，褐黑色，无渗出液；菌落反面略带黄色。

3.根据权利要求1所述的一种高效微生态混合肥的制备方法，其特征在于，所述黑曲霉CGMCC No.7927的发酵步骤如下：

(1)种子培养：将黑曲霉CGMCC No.7927接入500mL三角瓶中，种子培养基装量100毫升，30℃、150rpm摇床培养72-96h。

(2)种子罐培养：将种子液以10％(v/v)接种量接入装有7.5L发酵液的10L发酵罐中，控制pH值恒定为6.0±0.2，培养温度30±0.1℃，搅拌速度300rpm，通风量(v/v)1∶0.8-1.2，培养时间96h，溶解氧20-30％；所述发酵培养基组成为：纤维素粉100g、硫酸铵5g、硫酸镁0.25g、磷酸二氢钾1g、氯化钠0.1g、自来水定容1000mL，pH值5-6，121℃灭菌20min。

4.根据权利要求3所述的一种高效微生态混合肥的制备方法，其特征在于，

所述黑曲霉CGMCC No.7927经发酵结束后，发酵上清液中的外切β-葡聚糖酶、内切β-葡聚糖酶、β-葡萄糖苷酶和滤纸酶活力分别达到620U/mL、1289U/mL、456U/mL和732U/mL。