[发明专利]一种具有pH响应的灵芝多糖-苯硼酸-甲氨蝶呤结合物载药纳米粒子及其制备方法

说明书

本发明公开了一种具有pH响应的灵芝多糖‑苯硼酸‑甲氨蝶呤结合物载药纳米粒子及其制备方法，其特征在于，所述的灵芝多糖‑苯硼酸‑甲氨蝶呤结合物由灵芝多糖、苯硼酸和甲氨蝶呤化学连接形成，灵芝多糖作为亲水段、甲氨蝶呤作为疏水段，灵芝多糖‑苯硼酸‑甲氨蝶呤结合物在水溶液中自组装包载10‑羟基喜树碱以形成载药纳米粒子。

技术领域

本发明涉及一种具有pH响应的灵芝多糖-苯硼酸-甲氨蝶呤结合物载药纳米粒子及其制备方法，属于生物医药和纳米医药技术领域。

背景技术

灵芝作为中国传统的名贵中药材，具有滋补强身、扶正固本、轻身延年的功效，灵芝多糖是灵芝最有效的成分之一。近年来，国内外大量的研究工作致力于灵芝多糖的提取、分离、纯化和结构验证，并且研究了灵芝多糖的抗肿瘤和增强免疫力的药理作用。但将灵芝多糖作为纳米药物载体材料的研究目前几乎没有报道。

药物递送系统(drug delivery systems,DD_S)具有增强渗透性和保留效应，且纳米载体可以有效地改善细胞摄取，增加疏水性药物的溶解能力，药物在疾病部位积累无泄漏，并控制细胞内药物释放以提高细胞内药物的浓度而导致细胞的死亡。智能的药物输运系统(DDSs)提供了一种高效的治疗手段，可以在患病的组织或细胞定点释放，以及在特定的病变及特定生理环境下进行相应的智能控制释放，从而改善药物在体内分布，增强治疗作用，并降低毒副反应的效果，具有广阔的应用前景。

多糖不仅具有安全性、无毒性、亲水性和生物可降解性等特点，而且生物相容性好，可降解。此外，由于多糖分子链上存在数量较多的活泼基团(如羟基、氨基等)，因此可以很方便地对多糖进行化学修饰，获得不同种类的多糖衍生物。以上优点使多糖成为药物输送系统DDs的重要组成材料。灵芝多糖GLP是一种天然高分子多糖，是灵芝最有效的成分之一，由三股单糖链构成的、具有螺旋状立体构形(三级结构)的葡聚糖，是一种大分子化合物，其分子量从数千到数十万，其分子结构中的大量羟基使其具有较强的亲水能力，因此可作为大分子亲水链。研究表明，硼酸在弱碱性环境下会自发地与含邻二醇结构的化合物结合，形成在酸性环境下可断裂的硼酸酯键。人体正常组织的pH为7.4，是中性环境，而肿瘤部位为酸性环境。甲氨蝶呤(MTX)是一种有抗叶酸类抗肿瘤药物。但由于其水溶性很差，缺乏靶向性，在体内的循环时间很短，在很大程度上限制了它的临床应用。

在此基础上，本研究设计并制备了以硼酸为桥接段，利用化学键连接的方式，使疏水性的小分子抗癌药物甲氨蝶呤与灵芝多糖分子链连接，同时使其具有刺激 -响应性能，自组装形成纳米胶束，灵芝多糖与甲氨蝶呤协同作用，增加药物的抗癌作用。迄今为止，还没有以灵芝多糖为材料的pH值响应型纳米药物载体研究的报道

发明内容

本发明的目的是建立一种具有pH响应的灵芝多糖-苯硼酸-甲氨蝶呤结合物载药纳米粒子及其制备方法，本发明方法制备的灵芝多糖-苯硼酸-甲氨蝶呤载药纳米粒子具有良好的pH响应性能和生物相容性。本发明制备的以灵芝多糖为材料的载药纳米粒子制备方法操作简单，没有使用表面活性剂，具有靶向性和低毒性。

本发明提出的一种具有pH响应的灵芝多糖-苯硼酸-甲氨蝶呤结合物载药纳米粒子及其制备方法，其特征在于，所述的灵芝多糖-苯硼酸-甲氨蝶呤结合物由灵芝多糖、苯硼酸和甲氨蝶呤化学连接形成，灵芝多糖作为亲水段、甲氨蝶呤作为疏水段，灵芝多糖-苯硼酸-甲氨蝶呤结合物在水溶液中自组装包载10-羟基喜树碱以形成载药纳米粒子；

所述的灵芝多糖-苯硼酸-甲氨蝶呤复合物为式Ⅰ所示的结构：

本发明的技术方案：

一种具有pH响应的灵芝多糖-苯硼酸-甲氨蝶呤结合物的合成：

本发明所述的灵芝多糖-苯硼酸-甲氨蝶呤结合物载药纳米粒子的制备方法，包括以下步骤：