[发明专利]一种表达新城疫病毒F蛋白的传染性喉气管炎重组病毒株及其构建方法和应用

说明书

一种表达新城疫病毒F蛋白的传染性喉气管炎重组病毒株及其构建方法和应用，涉及重组病毒疫苗领域。本发明针对利用ILTV非必须基因US9位点开展外源免疫原基因的重组病毒构建和应用的问题，提供了一种传染性喉气管炎病毒重组疫苗株，命名为rILTV△US9‑NDV‑F，微生物保藏号是：CGMCC No.14738，该病毒株是将新城疫病毒F基因(NDV‑F)替换传染性喉气管炎病毒的US9基因，构建获得缺失US9基因并在其相应位置插入NDV‑F表达盒的重组新城疫病毒F蛋白的传染性喉气管炎病毒，本发明获得的重组传染性喉气管炎病毒疫苗株可用于制备预防传染性喉气管炎和其他鸡传染病的疫苗。

技术领域

本发明涉及重组病毒疫苗领域，具体涉及一种表达新城疫病毒F蛋白的传染性喉气管炎重组病毒株及其构建方法和应用。

背景技术

传染性喉气管炎(Infectious Laryngotracheitis,ILT)是由传染性喉气管炎病毒(Infectious Laryngotracheitis virus,ILTV)引起一种鸡急性上呼吸道病毒性传染病。传染性喉气管炎病毒主要感染鸡呼吸系统，尤其是气管上皮是病毒主要繁殖场所。感染鸡发病时表现为张口呼吸、咳血、结膜炎、流泪等症状，部分强毒感染致死率达100％。本病1925年在美国首次报道后，现已遍及世界许多养鸡地区。本病传播快，死亡率较高，在我国较多地区发生和流行，给养鸡业造成巨大经济损失，是危害养鸡业的重要疫病之一。

传染性喉气管炎病毒的自然感染仅限于鸡，幼龄火鸡、野鸡、鹌鹑和孔雀也可感染，但以成年鸡症状最为特征。鸭、鸽、珍珠鸡、麻雀及所有哺乳动物不易感。病鸡、康复后的带毒鸡和无症状的带毒鸡是主要传染来源。传染性喉气管炎病毒与其它疱疹病毒一样，ILTV的潜伏和激活都可以引起该病在鸡群中爆发。病毒的感染与品种、年龄和性别无关，成年鸡感染率较幼龄鸡高。本病一旦传入鸡群，则迅速传开，感染率可达90％以上，死亡率一般在10％以上，部分强毒死亡率达到70％。传染性喉气管炎病毒只有一个血清型，免疫接种是防治该病的最有效手段。目前国内外预防传染性喉气管炎使用较广泛的是弱毒疫苗，此类疫苗具有免疫效果好、免疫保护力产生快的特点，给鸡群进行免疫接种能有效预防该病。然而，随着畜禽集约化养殖业的发展，单价疫苗已显示出其一定的弊端，多次免疫的防控措施费时费力，多价联合疫苗便成为养殖业最受欢迎的疫病防控产品，因而开展鸡病多价联合疫苗成为必然选择。

ILTV属疱疹病毒科，疱疹病毒甲亚科，传喉炎病毒属，禽疱疹病毒I型(Herpesviridae，Alphaherpesvirinae，Iltovirus Gallid，herpesvirus 1)。其基因组为双股线性DNA，大小约155kb，基因组具有典型的疱疹病毒结构，具有典型的疱疹病毒D型结构。病毒基因组结构由一个长独特区(UL)和一个短独特区(US)，在US区末端有末端重复序列(TRS)，UL和US区之间有一反向重复序列(IRS)，IRS与TRS序列相同但方向相反，由共价结合的两个区域组成，包括长独特区(UL)和短独特区(US)。

疱疹病毒基因组包含大量的复制非必需基因，包括TK、gC、gG、gK、US1、US2、US9、UL41、UL42、US7和US8等。在相关研究中将外源基因插入或替代疱疹病毒的非必须基因，构建重组病毒疫苗，这被认为是一种良好的重组活疫苗病毒载体，目前有关疱疹病毒作为载体的报道包括伪狂犬病载体、传染性喉气管炎病毒载体、马力克氏病毒载体以及火鸡疱疹病毒载体等。随着对传染性喉气管炎病毒研究的不断加深，以ILTV为病毒活载体受到更加广泛的关注，ILTV作为载体的优势在于该病毒宿主范围较窄，对鸭、鸽、珍珠鸡、麻雀及所有哺乳动物均不易感，无致病性，因此即使这些非自然宿主呼吸道瞬时增殖也不会对人和其他动物的健康安全造成影响，这对开发ILTV病毒活载体疫苗具有重要意义。