[发明专利]一种肺癌实体瘤组织样本解离液在审
| 申请号： | 201810426613.X | 申请日： | 2018-05-07 |
| 公开（公告）号： | CN110452878A | 公开（公告）日： | 2019-11-15 |
| 发明（设计）人： | 席建忠;尹申意;李娟 | 申请（专利权）人： | 北京吉尚立德生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/09 | 分类号： | C12N5/09 |
| 代理公司： | 11245 北京纪凯知识产权代理有限公司 | 代理人： | 关畅;张立娜<国际申请>=<国际公布>= |
| 地址： | 北京市海淀区东北旺*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 样本解 离液 肺癌 实体瘤组织 胶原酶IV 胶原酶I 构建 原代细胞培养物 动物模型 临床诊断 试剂处理 体外实验 细胞水平 癌细胞 测序 解离 细胞 治疗 应用 保证 研究 | ||
1.一种肺癌实体瘤组织样本解离液，其特征在于：所述样本解离液由胶原酶I、胶原酶IV和PBS组成；其中，所述胶原酶I在所述样本解离液中的终浓度为150-250U/mL；所述胶原酶IV在所述样本解离液中的终浓度为150-250U/mL；余量均为PBS。
2.根据权利要求1所述的样本解离液，其特征在于：所述样本解离液为由所述胶原酶I、所述胶原酶IV和所述PBS混合而成的溶液。
3.根据权利要求1所述的样本解离液，其特征在于：所述样本解离液中的各组分单独存在。
4.根据权利要求3所述的样本解离液，其特征在于：所述胶原酶I和所述胶原酶IV以母液形式存在；
具体的，所述母液为10倍母液；
10×胶原酶I溶液由所述胶原酶I和PBS组成；其中，所述胶原酶I的终浓度为2000U/mL；余量均为PBS；
10×胶原酶IV储液由所述胶原酶IV和PBS组成；其中，所述胶原酶IV的终浓度为2000U/mL；余量均为PBS。
5.一种用于从肺癌实体瘤组织中解离出肺癌实体瘤原代细胞的成套试剂，含有权利要求1-4中任一所述的样本解离液和权利要求9中所述的消化终止液。
6.权利要求1-4中任一所述的样本解离液或权利要求5所述的成套试剂在从肺癌实体瘤组织中解离出肺癌实体瘤原代细胞中的应用。
7.一种从肺癌实体瘤组织中解离出肺癌实体瘤原代细胞的方法，包括如下步骤：按0.1-0.3mL权利要求1-4中任一所述的样本解离液每mg组织的用量，将剪碎后的肺癌实体瘤组织用事先37℃预热的所述样本解离液进行处理，在37℃条件下进行样本解离，解离时间15分钟至3小时。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：在用所述样本解离液对所述肺癌实体瘤组织进行解离处理后还包括如下步骤：用消化终止液终止解离反应，收集细胞悬液；过滤所述细胞悬液，去除组织残片和粘连细胞。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：所述消化终止液由胎牛血清、双抗P/S和DMEM培养基组成；其中，所述胎牛血清在所述消化终止液中的终浓度为8-12％(体积百分含量)；所述双抗P/S中的青霉素在所述消化终止液中的终浓度为100-200U/mL；所述双抗P/S中的链霉素在所述消化终止液中的终浓度为100-200μg/mL；余量均为DMEM培养基。
10.根据权利要求1-9中任一所述的样本解离液或成套试剂或应用或方法，其特征在于：所述肺癌为原发性肺癌，病理分期为II期或III期，病理分型为非小细胞肺癌或小细胞肺癌。
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